Thermo Scientific™ ActivX™ Destiobiotin-FP Serine Hydrolas Probe

ActivX™ FP-prober har en reaktiv fluorofosfonatgrupp som specifikt och kovalent märker serinet på det aktiva stället i enzymatiskt aktiva serinhydrolaser. Dessa sonder är tillgängliga med en destiobiotin (biotinanalog)-tagg för selektiv anrikning eller en reaktiv azidogrupp (Staudinger-reagens) som underlättar multiplexmärkning när de används med fosfin- eller alkynderivatiserade taggar.

ActivX aktiva ställenanrikningsprober är fördelaktiga för att bestämma aktiva enzymnivåer med användning av analogmärkta prober för att möjliggöra profilering av både inaktiva och aktiva enzymer. De ActivX prober berikar selektivt endast de enzymer som är funktionellt aktiva och biologiskt relevanta vid tidpunkten för märkning. Med selektiv anrikning kan man identifiera och profilera målenzymklasser över prover eller kan bedöma specificiteten och affiniteten hos enzymhämmare.

Tillämpningar av ActivX FP-sonder:
• Bestäm serinhydrolasenzymaktivitet i celler och lysat
• Kartläggning av serinet på det aktiva stället för funktionellt olika familjemedlemmar av serinhydrolas (t.ex. proteaser, lipaser, esteraser)
• Screen för bindningsaffiniteter för små molekyler och hämning av det aktiva stället
• Profilera serinhydrolaser med hjälp av fluorescerande, Western blot eller masspektrometri

-arbetsflöden. Serinhydrolas-superfamiljen är en av de största, mest olika enzymfamiljerna i eukaryota proteomer. Serinhydrolaser är i allmänhet grupperade i två stora familjer: serinproteaser (t.ex. trypsin, elastas och trombin) och metaboliska serinhydrolaser. Metaboliska serinhydrolaser delas in i flera enzymsubklasser (t.ex. esteraser, lipaser, amidaser och peptidaser) baserat på struktur, katalytisk mekanism och substratpreferens. Dessa prober kan användas för att bedöma aktivitet eller screena hämmare av små molekyler mot enzymer härledda från cellysat, subcellulära fraktioner, vävnader och rekombinanta proteiner.

Bedömning av märkning av aktivt ställe med destiobioin-prober kan utföras med antingen Western blot eller masspektrometri (MS). För Western blot-arbetsflödet berikas destiobiotinmärkta proteiner för SDS-PAGE-analys och efterföljande detektion med specifika antikroppar. För MS-arbetsflödet reduceras destiobiotinmärkta proteiner, alkyleras och smälts enzymatiskt till peptider. Endast destiobiotinmärkta peptiderna med aktiva ställen berikas för analys med LC-MS/MS. Båda arbetsflödena kan användas för att bestämma inhibitormålbindning, men endast MS-arbetsflödet kan identifiera globala inhibitormål och off-targets. Azido-FP-sonden kan användas i kombination med en fosfin- eller alkynderivatiserad tagg för antingen detektion eller anrikning av serinhydrolaser med hjälp av Western blot eller masspektrometri.

Dessa produkter är föremål för en etikettlicens för begränsad användning.