Invitrogen™ ProcartaPlex™ Human Akt Pathway Panel, totalt, 8plex

Panelen är validerad för användning med cellysat. För beredning av cellysat rekommenderar vi användning av antingen ProcartaPlex Celllysbuffert (kat. nr. EPX-999999-900) eller cellextraktionsbuffert (kat. nr. FNN0011) kompletterad med 0,5 M EDTA och Halt-proteas- och fosfatashämmare engångscocktail (–100X) (kat. nr. 78440 eller 7). Dessa buffertar ingår inte i panelen. Beroende på ditt cellsystem kan andra buffertar också vara lämpliga.

Panelen tillhandahålls i ett bruksfärdigt format med individuella flaskor med infångnings- och detektionsreagens formulerade i 1X koncentration, vilket kräver mindre pipettering och experimentell installation.

ProcartaPlex förkonfigurerade paneler testas omfattande för analytkombinabilitet, interferens och korsreaktivitet för att ge högsta nivå av validering och precision. Alla ProcartaPlex panelerna levereras med nödvändiga reagenser för att utföra analysen.

Detta kit är kompatibelt med alla Luminex instrument. Om du använder en xMAP INTELLIFLEX DR-SE-instrument, vi rekommenderar att du använder vårt ProcartaPlex Human Akt Pathway Dual Reporter Panel, 2x8plex (kat.nr. EPX080-97200-DR), som möjliggör samtidig kvantifiering av totala och fosforylerade proteiner på samma kula i en enda brunn.

Mål [pärlregion]: Akt [47], CREB [43], GSK-3 beta [56], IGF-1R [34], IRS-1 [37], mTor [26], PRAS40 [42], p70S6K [27]

Om ProcartaPlex Analyser för Luminex Plattform

ProcartaPlex immunanalyser är baserade på principerna för en smörgås ELISA genom att använda två mycket specifika antikroppar som binder till olika epitoper av ett protein för att kvantifiera alla proteinmål samtidigt med hjälp av en Luminex instrument. ProcartaPlex multiplexanalyser kräver så lite som 25μ L plasma eller serum eller 50μ L cellkultursupernatant och bara fyra timmar för att erhålla analyserade resultat.

• Fler resultat per prov —mäter flera proteinmål samtidigt i en enda 25 50–μ L prov
• Väletablerad Luminex teknologin —mycket refererad multiplexeringsplattform för proteindetektion och kvantifiering

ProcartaPlex analyser använda Luminex xMAP (multianalytprofilering) teknologi för samtidig detektering och kvantifiering av upp till 80 proteinmål i en –enda 25 50μ L-prov från plasma, serum, cellkultursupernatant, cellysat och andra kroppsvätskor.

De Luminex pärlor i ProcartaPlex analysen är internt färgade med exakta proportioner av röda och infraröda fluoroforer för att skapa spektralt unika signaturer som kan identifieras av Luminex xMAP detektionssystem (t.ex. Luminex 200 , FLEXMAP 3D , xMAP INTELLIFLEX, xMAP INTELLIFLEX DR-SE, och MAGPIX ). Liknar en smörgås ELISA , den ProcartaPlex analysen använder matchade antikroppspar för att identifiera proteinet av intresse. I en multiplexad analys märks varje spektralt unik pärla med antikroppar specifika för ett enda målprotein, och bundna proteiner identifieras med biotinylerade antikroppar och streptavidin R-–fykoerytrin (RPE). Konjugeringen av proteinspecifika antikroppar till en distinkt pärla möjliggör analys av flera mål i en enda brunn.

Dessutom xMAP INTELLIFLEX DR-SE System erbjuder dubbla rapporteringsfunktioner, som tillåter mätning av en andra parameter för analyten, och har sidoutmatningsfunktioner för ökad flexibilitet och automatisering. Tillsammans med ProcartaPlex signalanalyser, den xMAP INTELLIFLEX DR-SE-instrument möjliggör kvantifiering och multiplexering av fosforylerade och totala proteiner i samma brunn, på samma Luminex pärla, och i samma analyskörning.

Den viktigaste skillnaden mellan en ProcartaPlex analys och ELISA är att infångningsantikroppen i ProcartaPlex analysen är konjugerad till en pärla och adsorberas inte till mikroplattans brunn, så att ProcartaPlex analysreagenser är fritt flytande i lösningen. För upptäckt, den Luminex 200 instrumentet innehåller till exempel två lasrar, en för att särskilja den spektrala signaturen för varje kula och den andra för att kvantifiera mängden RPE-fluorescens, vilket är proportionellt mot mängden protein som finns i provet. ProcartaPlex multiplexanalyser kan profilera fler målproteiner genom att använda betydligt mindre prov på samma tid som det tar att utföra en traditionell smörgås ELISA .