Invitrogen™ Alexa Fluor™ 488 NHS Ester (succinimidylester)

Alexa Fluor™ 488 är ett ljust, grönt fluorescerande färgämne med excitation som är idealiskt lämpat för 488 nm laserlinjen. Används för stabil signalgenerering inom bildbehandling och flödescytometri, Alexa Fluor™ 488-färgämne är vattenlösligt och pH-okänsligt från pH 4 till pH 10. Förutom reaktiva färgämnen erbjuder vi Alexa Fluor™ 488-färgämne konjugerat till en mängd olika antikroppar, peptider, proteiner, spårämnen och amplifieringssubstrat optimerade för cellulär märkning och detektion.

NHS-estern (eller succinimidylestern) av Alexa Fluor™ 488 är det mest populära verktyget för att konjugera detta färgämne till ett protein eller en antikropp. NHS-estrar kan användas för att märka primära aminerna (R- _NH2 ) av proteiner, aminmodifierade oligonukleotider och andra amininnehållande molekyler. Den resulterande Alexa Fluor™-konjugat kommer att uppvisa ljusare fluorescens och större fotostabilitet än konjugaten av andra spektralt liknande fluoroforer.

Detaljerad information om denna AlexaFluor™ NHS ester:

• Fluoroformärkning: Alexa Fluor™ 488-färgämne
• reaktiv grupp: NHS-ester
• reaktivitet: Primära aminer på proteiner och ligander, aminmodifierade oligonukleotider
• Ex/Em av konjugatet: 494/517 nm
• Extinktionskoefficient: 73 000 cm ^-1M^-1
• Spektralt liknande färgämnen: FITC, Oregon Green 488
• Molekylvikt: 643,4

Typisk konjugeringsreaktion
Du kan Du kan konjugera aminreaktiva reagenser med praktiskt taget alla proteiner eller peptider (det medföljande protokollet är optimerat för IgG-antikroppar). Du kan anpassa reaktionen till valfri mängd protein, men proteinkoncentrationen bör vara minst 2 mg/mL för bästa resultat. Vi rekommenderar att du provar tre olika grader av märkning, med tre olika molära förhållanden mellan det reaktiva reagenset och proteinet.

Alexa Fluor™ NHS-ester löses vanligtvis i högkvalitativ vattenfri dimetylformamid (DMF) eller dimetylsulfoxid (DMSO) (D12345), och reaktionen utförs i 0,1 –0,2 M natriumbikarbonatbuffert, pH 8,3, vid rumstemperatur under 1 timme. Eftersom pKa för den terminala aminen är lägre än den för lysinepsilon-aminogruppen, kan du uppnå mer selektiv märkning av aminterminalen med en buffert närmare neutralt pH.

Konjugatrening
Märkta antikroppar separeras vanligtvis från fri Alexa Fluor™-färg med hjälp av en gelfiltreringskolonn, såsom Sephadex™ G-25, BioGel™ P-30 eller motsvarande. För mycket större eller mindre proteiner, välj ett gelfiltreringsmedium med en lämplig molekylviktsgräns eller rena genom dialys. Vi erbjuder flera reningssatser optimerade för olika mängder antikroppskonjugat:

• Antikroppskonjugatreningssats för 0,5–1 mg (kat.nr A33086)
• Antikroppskonjugatreningssats för 20–50μ g kat.nr A33087)
• Antikroppskonjugatreningskit för 50–100μ g (kat.nr. A33088)

Lär dig mer om protein- och antikroppsmärkning
Vi erbjuder ett brett urval av molekylära sonder™ antikropps- och proteinmärkningssatser för att passa ditt startmaterial och din experimentuppställning. Se våra antikroppsmärkningssatser eller använd vårt Labeling Chemistry Selection Tool för andra val. För att lära dig mer om våra märkningssatser, läs Kits for Labeling Proteins and Nucleic Acids—Avsnitt 1.2 i användarmanualen The Molecular Probes.

Vi
kommer att göra ett anpassat konjugat åt dig Om du inte’ kan hitta ’det du letar efter i vår onlinekatalog, kommer vi att förbereda en anpassad antikropp eller proteinkonjugat åt dig. Vår tjänst för anpassad konjugering är effektiv och konfidentiell, och vi står för kvaliteten på vårt arbete. Vi är ISO 13485:2000 certifierade.