Molecular Probes™ Alexa Fluor™ 488 TFP ester

Alexa Fluor™ färgämnen är reaktiva molekyler som kan användas för att lägga till en fluorescerande märkning till de primära aminerna (R-NH ₂ ) av proteiner, aminmodifierade oligonukleotider och andra amininnehållande molekyler. Det resulterande Alexa Fluor™ konjugat uppvisar ljusare fluorescens och större fotostabilitet än konjugaten av andra spektralt liknande fluoroforer. Alexa Fluor™ 488 TFP-ester producerar ett konjugat med excitation/emission på 495/515 nm som spektralt liknar fluorescein (FITC) och Cy2 konjugat.

Alexa Fluor™ färgämnen finns tillgängliga med fluorescensemissioner som spänner över det synliga och nära-infraröda spektrumet (se Alexa Fluor™ Dye Series Note —1.1 i The Molecular Probes™ handbok) och tillhandahåller den unika kombinationen av vattenlöslighet och pH-okänslighet mellan pH 4 och 10 för kompatibilitet i olika biologiska miljöer.

TFP (tetrafluorfenyl)-estrar är en förbättring jämfört med succinimidylesterkemin (SE eller NHS-ester) som vanligtvis används för att fästa fluoroforer eller haptener till de primära aminerna i biomolekyler. Båda reaktiva kemierna producerar samma starka amidbindning mellan färgämnet eller haptenen och föreningen av intresse, men TFP-estrar är mindre mottagliga för spontan hydrolys under konjugeringsreaktioner. Alexa Fluor™ TFP-estrar är stabila i flera timmar vid det basiska pH som vanligtvis används för reaktioner –som varar långt utöver succinimidylestrar.

Typisk konjugeringsreaktion Du
kan konjugera aminreaktiva reagens med praktiskt taget vilket protein eller vilken peptid som helst; det medföljande protokollet är optimerat för IgG-antikroppar. Du kan skala reaktionen för vilken mängd protein som helst, men koncentrationen av proteinet bör vara minst 2 mg/ml för optimala resultat. Vi rekommenderar att du provar tre olika grader av märkning, med tre olika molförhållanden mellan det reaktiva reagenset och proteinet.

De Alexa Fluor™ TFP-ester löses typiskt i högkvalitativ, vattenfri dimetylsulfoxid (DMSO) (D12345), och reaktionen utförs i 0,1 –0,2 M natriumbikarbonatbuffert, pH 8,3, vid rumstemperatur under 1 timme. Eftersom pKa för den terminala aminen är lägre än den för lysinepsilon-aminogruppen, kan du uppnå mer selektiv märkning av aminterminalen med en buffert närmare neutralt pH.

Konjugatrening Märkta
antikroppar separeras vanligtvis från fria Alexa Fluor™ färg med hjälp av en gelfiltreringskolonn, såsom Sephadex™ G-25, BioGel™ P-30 eller motsvarande. För mycket större eller mindre proteiner, välj ett gelfiltreringsmedium med en lämplig molekylviktsgräns eller rena genom dialys.

Lär dig mer om protein- och antikroppsmärkning
Vi erbjuder ett brett urval av Molecular Probes™ antikropps- och proteinmärkningssatser för att passa ditt startmaterial och din experimentuppställning. Se Antikroppsmärkning från A till Ö eller använd vårt urvalsverktyg för märkningskemi för andra val. För att lära dig mer om våra märkningssatser, läs Kit för märkning av proteiner —och nukleinsyror avsnitt 1.2 i Molecular Probes™ Handbok.

Vi ’kommer att göra ett anpassat konjugat åt dig
Om ’du inte kan hitta ’det du letar efter i vår onlinekatalog, kommer vi ’att förbereda en anpassad antikropp eller proteinkonjugat åt dig. Vår anpassade konjugationstjänst är effektiv och konfidentiell, och det är vi ISO 13485:2000 certifierad.