Invitrogen™ Alexa Fluor™ 647 C2 _- maleimid

Alexa Fluor™ 647 är ett ljust, långt rött fluorescerande färgämne med excitation idealiskt för 594 nm eller 633 nm laserlinjer. Används för stabil signalgenerering inom bildbehandling och flödescytometri, Alexa Fluor™ 647 färgämne är vattenlösligt och pH-okänsligt från pH 4 till pH 10. Förutom reaktiva färgämnen erbjuder vi Alexa Fluor™ 647-färgämne konjugerat till en mängd olika antikroppar, peptider, proteiner, spårämnen och amplifieringssubstrat optimerade för cellulär märkning och detektion.

Maleimidderivatet av Alexa Fluor™ 647 är det mest populära verktyget för att konjugera färgämnet till en tiolgrupp på ett protein, oligonukleotidtiofosfat eller lågmolekylär ligand. Det resulterande Alexa Fluor™ 647-konjugat uppvisar ljusare fluorescens och större fotostabilitet än konjugaten av andra spektralt liknande fluoroforer.

Detaljerad information om detta AlexaFluor™ maleimid:

Fluoroforetikett: Alexa Fluor™ 647 färgämnes
reaktiv grupp:
maleimidreaktivitet: tiolgrupper på proteiner och ligander, oligonukleotidtiofosfater
Ex/Em av konjugatet: 651/671
nm Extinktionskoefficient: 265 000 cm-1M-1
Spektralt liknande färgämnen: Cy5
Molekylvikt: ∼1250

Typisk konjugeringsreaktion
Proteinet bör lösas i en koncentration av 50-100 M μi en lämplig buffert (10-100 mM fosfat, Tris eller HEPES) vid pH 7,0-7,5. Inom detta pH-område är proteintiolgrupperna tillräckligt nukleofila för att de reagerar nästan uteslutande med reagenset i närvaro av de mer talrika proteinamingrupperna, som är protonerade och relativt oreaktiva. Vi rekommenderar att du reducerar eventuella disulfidbindningar vid denna tidpunkt med ett 10-faldigt molärt överskott av reduktionsmedel som DTT eller TCEP. Överskott av DTT måste avlägsnas genom dialys och efterföljande tiolmodifiering bör utföras under syrefria förhållanden för att förhindra reformering av disulfidbindningarna; dessa försiktighetsåtgärder är inte nödvändiga vid användning av TCEP före maleimidkonjugering.

De Alexa Fluor™ maleimid löses vanligtvis i högkvalitativ vattenfri dimetylsulfoxid (DMSO) i en koncentration av 1-10 mM omedelbart före användning, och stamlösningar bör skyddas från ljus så mycket som möjligt. I allmänhet tillsätts denna stamlösning till proteinlösningen droppvis under omrörning för att producera cirka 10-20 mol reagens per mol protein, och reaktionen får fortgå vid rumstemperatur under 2 timmar eller vid 4 C över °natten, skyddad från ljus. Vilket som helst oreagerat tiolereaktivt reagens kan konsumeras genom att tillsätta överskott av glutation, merkaptoetanol eller annan löslig tiol med låg molekylvikt.

Konjugatrening
Märkta antikroppar separeras vanligtvis från fria Alexa Fluor™ färg med hjälp av en gelfiltreringskolonn, såsom Sephadex™ G-25, BioGel™ P-30 eller motsvarande. För mycket större eller mindre proteiner, välj ett gelfiltreringsmedium med en lämplig molekylviktsgräns eller rena genom dialys. Vi erbjuder flera reningssatser optimerade för olika mängder antikroppskonjugat:
Antikroppskonjugatreningskit för 0,5-1 mg (kat.nr. A33086)
Antikroppskonjugatreningskit för 20-50μ g (Kat. nr. A33087)
Antikroppskonjugatreningskit för 50-100μ g (Kat. nr. A33088)

Lär dig mer om protein- och antikroppsmärkning Vi
erbjuder ett brett urval av Molecular Probes™ antikropps- och proteinmärkningssatser för att passa ditt startmaterial och din experimentuppställning. Se våra antikroppsmärkningssatser eller använd vårt Labeling Chemistry Selection Tool för andra val. För att lära dig mer om våra märkningssatser, läs Kit för märkning av proteiner —och nukleinsyror avsnitt 1.2 i Molecular Probes™ Handbok.

Vi ’kommer att göra ett anpassat konjugat åt dig
Om ’du inte kan hitta ’det du letar efter i vår onlinekatalog, kommer vi ’att förbereda en anpassad antikropp eller proteinkonjugat åt dig. Vår tjänst för anpassad konjugering är effektiv och konfidentiell, och vi står för kvaliteten på vårt arbete. Det är vi ISO 13485:2000 certifierad.