Invitrogen™ Cells-to-cDNA™ II Kit

De Ambion™ Cells-to-cDNA™ II Kit (patentsökt) producerar cDNA från odlade däggdjursceller på mindre än 2 timmar. Ingen RNA-isolering krävs. Detta kit innehåller tillräckligt med reagenser för 100 reaktioner och är idealiskt för dem som vill utföra omvända transkriptionsreaktioner på ett litet antal celler, många cellprover eller för forskare som inte är bekanta med RNA-isolering.

• Ingen RNA-rening krävs
• Från celler i kultur till cDNA på mindre än 2 timmar
• Upptäck sällsynta meddelanden i så få som 1 cell
• Idealisk för labb som inte är utrustade för

RNA-isolering Idealisk för RT-PCR-applikationer
Cells-to-cDNA™ II Kit (patentsökt) integrerar RNas-inaktivering och DNas I-behandling i en RT-PCR-kompatibel cellysbuffert, vilket eliminerar RNA-isolering helt och hållet. De flesta cellysbuffertar innehåller starka denatureringsmedel som om de överförs till enzymatiska reaktioner skulle hämma eller inaktivera de flesta enzymer. Om en lysbuffert utan starka denatureringsmedel används kan endogent RNas snabbt bryta ned cellulärt RNA. De Cells-to-cDNA™ II Kit innehåller en ny celllysbuffert som inaktiverar endogena RNaser utan att kompromissa nedströms enzymatiska reaktioner. Efter inaktivering av RNaser kan cellysatet tillsättas direkt till en cDNA-syntesreaktion. Cells-to-cDNA™ II är kompatibel med både ettstegs- och tvåstegs RT-PCR-protokoll.

Kvantitativa —linjära resultat och ingen detekterbar DNA-kontamination
För att illustrera det kvantitativa, linjära svaret av Cells-to-cDNA™ II till variationer i inmatat cellantal, utfördes ett kvantitativt RT-PCR-experiment i realtid med användning av ABI 7700 sekvensdetektionssystem. Plottning av cykeltröskel (Ct) kontra cellkoncentration för GAPDH gav en standardkurva med en korrelation på 0,99. Således, Cells-to-cDNA™ II ger linjära resultat för 1 till 10 000 celler/μ L i en realtids RT-PCR tvåstegsanalys. Det bör också noteras att minus-mall PCR-kontrollen för GAPDH-experimentet var negativ, vilket indikerar fullständigt avlägsnande av genomiskt DNA.

Enkel procedur
Satsen kommer med allt du behöver för att gå från odlade celler till PCR-färdigt cDNA på mindre än 2 timmar; ingen RNA-isolering krävs. Celler tvättas först med PBS och återsuspenderas sedan i celllysbufferten. En kort uppvärmning lyser samtidigt cellerna och inaktiverar RNaser. En valfri DNas-klyvning utförs sedan för att bryta ned genomiskt DNA, följt av ett värmeinaktiveringssteg. En del av cellysatet används sedan i en omvänd transkriptionsreaktion med de inkluderade reagensen.

Tillbehörsprodukter:
SuperTaq™ Termostabil Taq DNA-polymeras rekommenderas och finns tillgängligt separat (kat. nr. AM2050 och AM2052). För optimal amplifiering av fragment större än 1 kb, använd SuperTaq™ Plus termostabil Taq DNA-polymeras (kat. nr AM2054 och AM2056).