Invitrogen™ FirstChoice™ RLM-RACE Kit

FirstChoice™ RLM-RACE-kitet är utformat för att amplifiera cDNA från fulllängds, capped mRNA genom RNA Ligase Mediated Rapid Amplification of cDNA Ends (RLM-RACE). Kitet säkerställer amplifiering av endast fulllängdstranskript genom att eliminera ribosomalt RNA, fragmenterat mRNA, tRNA och kontaminerande genomiskt DNA under amplifikationsprocessen. Detta kit är en stor förbättring jämfört med det grundläggande RACE-protokollet (rapid amplification of cDNA ends).

Notera: kalv-intestinal fosfatas (CIP) hade ersatts med FastAP Thermosensitive Alkaline Phosphatase Adjusted Protocol, vilket eliminerar behovet av fenol/kloroformextraktion och etanolfällning. Om det väljs kan fenol/kloroform-steget användas med uppdaterat kit efter verifiering av reaktionsvolymer.

Funktioner i RLM-RACE-kitet FirstChoice inkluderar:

• Väljer 5' och/eller 3' ändar av fulllängds, capped mRNA
• Optimerad för att säkerställa detektion även av sällsynta mRNA, vilket ger specifik produkt
• Gör det möjligt att slutföra experimentet på mindre än en dag

Selekterar fulllängds mRNA—utan rRNA, tRNA eller nedbrutet mRNA

I FirstChoice RLM-RACE-proceduren väljs fulllängds mRNA genom att behandla total- eller poly(A)-RNA med FastAP termosensitiv alkalisk fosfatas för att avlägsna 5'-fosfatet från alla molekyler som innehåller fria 5'-fosfater (ribosomalt RNA, fragmenterat mRNA, tRNA och kontaminerande genomiskt DNA). Fulllängds mRNA påverkas inte. RNA:t behandlas sedan med tobakssyrapyrofosfatas (TAP) för att avlägsna kapselstrukturen från det fulllängds mRNA:t, vilket lämnar en 5'-monofosfat. En syntetisk RNA-adapter är ligerad till RNA-populationen—, endast molekyler som innehåller en 5'-fosfat, de obegränsade, fulllängds mRNA:na, accepterar adaptern. Slumpmässigt primade, omvända transkriptionsreaktioner och nästlad PCR utförs sedan för att förstärka 5'-änden av ditt specifika transkript.

Från RNA till PCR på mindre än en dag

Varje steg i FirstChoice RLM-RACE-proceduren har optimerats, så att du kan slutföra alla enzymatiska reaktioner och till och med påbörja PCR på högst 5 timmar. RLM-RACE-kitet FirstChoice innehåller reagenser och enzymer för att producera 6 RLM-RACE-klara cDNA-preparat, primers och nästlade RACE-adapterprimers för 100 PCR-reaktioner. Kitet inkluderar omvänd transkriptionsreagenser och 3' RACE-adapter samt primers för 3' RACE. Varje kit innehåller kontroll-RNA och primers för att testa kitets prestanda, protokoll beskrivet i användarhandboken med Platinum™ hjälp av II Hot-Start PCR Master Mix.