Invitrogen™ PARIS™ Utrustning

De Invitrogen™ PARIS™ Systemet är för isolering av både RNA och naturligt protein från samma experimentella prov. Satsen tillåter även separation av nukleära och cytoplasmatiska fraktioner före RNA- och/eller proteinisolering. Satsen innehåller tillräckligt med reagens för 50 reningar från 1 till 75 mg vävnad eller 100 till 10 ⁷ celler vardera.

• Snabb, enkel procedur
• Isolera nukleärt och cytoplasmatiskt RNA och protein från odlade celler
• Isolera totalt RNA och protein från odlade celler eller vävnader
• Ingen fenolextraktion eller alkoholutfällning
• Minskar tid, kostnad och variation mellan oberoende experimentella

prover Isolering av högkvalitativt RNA är det första steget för en mängd olika genuttrycksanalyser. Mycket ofta krävs också kompletterande studier på proteinnivå. Vanligtvis utförs dessa analyser med användning av olika alikvoter av samma experimentella prov. Men när man arbetar med sällsynta, svåra att erhålla eller mycket små prover är det ibland opraktiskt att isolera RNA och naturliga proteiner oberoende av varandra. I studier som involverar ett stort antal prover, dyra reagens eller inneboende variabilitet (t.ex. celltransfektion), är tillägget av oberoende experimentella prover inte bara kostsamt och tidskrävande, utan kan också leda till inkonsekventa resultat. För att lösa dessa problem, protein- och RNA-isoleringssystemet (PARIS™ system) har utvecklats. Det möjliggör isolering av både RNA och protein från samma experimentella prov (se figur). Med hjälp av PARIS™ system, RNA och protein kan isoleras samtidigt från helcellslysat. Alternativt kan RNA och protein isoleras från separata nukleära och cytoplasmatiska fraktioner. Vävnads- eller odlade celler homogeniseras först i iskall Cell Disruption Buffer för att framställa ett totalt cellysat. Eftersom homogeniseringen utförs snabbt på is och i närvaro av detergent, kan både protein och RNA renas direkt från detta lysat. För RNA-isolering blandas en del av det totala cellysatet omedelbart med en lika stor volym Lysis/Binding Solution. Totalt RNA renas sedan från blandningen med användning av ett RNA-bindande glasfiberfilter. Efter tre snabba tvättsteg elueras högkvalitativt RNA i koncentrerad form. Hela proceduren kan slutföras på mindre än 20 minuter. Obs: Detta kit rekommenderas inte för vävnader med höga nivåer av ribonukleaser, såsom bukspottkörteln.

Kompatibel med de flesta nedströmsapplikationer
RNA isolerat från totala, nukleära eller cytoplasmatiska fraktioner med PARIS™ förfarandet kan användas i en mängd olika nedströmsapplikationer, inklusive blöthybridisering, in vitro- translation, cDNA-syntes och RT-PCR. En DNas I-behandling rekommenderas för RNA som kommer att användas för RT-PCR-experiment (se Tillbehörsprodukter). Proteinfraktioner kan användas direkt för de flesta vanliga tillämpningar, inklusive funktionella analyser, immunoutfällning, western blotting eller tvådimensionell gelelektrofores (se figurer).

Tillbehörsprodukter:
TURBO™ DNA- fri™ eller DNA- fri™ Reagenser för DNase-behandling och borttagning (kat.nr. AM1907 respektive AM1906) är idealiska för att snabbt ta bort spårmängder av DNA från de totala och nukleära RNA-proverna utan fenolextraktion eller alkoholutfällning. Den cytoplasmatiska RNA-fraktionen är praktiskt taget fri från DNA-kontamination.