Invitrogen™ Enda Cell-to-CT™ qRT-PCR-kit

De Ambion Single Cell-to-C _T™ Kit innehåller ett komplett validerat arbetsflöde för genuttrycksanalys för prover som innehåller 1 10 –celler. Varje kit innehåller reagenser för provberedning, omvänd transkription, pre-amplifiering och qPCR som har optimerats tillsammans i ett enkelt arbetsflöde som kan slutföras i endast fem steg.

Föroptimerat protokoll säkerställer framgång och sparar tid

Varje arbetsflöde börjar med en enkel 7-minuters provförberedelse, där cellerna lyseras effektivt och reproducerbart med minimal bearbetning till en lösning som är kompatibel med nedströms RT-PCR, utan behov av rening. Detta följs av användningen av Superscript™ RT för omvänd transkription, den TaqMan™ PreAmp Master Mix för att amplifiera cDNA, och TaqMan Gene Expression Master Mix för qPCR. Alla dessa fyra steg har utvecklats för att ge maximal känslighet. Hela cellprovet hålls i samma brunn under hela proceduren så det finns ingen provförlust eller utspädning av det dyrbara begränsade materialet som kan påverka känsligheten.

Encellskänslighet

Känsligheten hos realtids-PCR-resultat kan påverkas av effektiviteten i provberedningen, omvänd transkription eller amplifiering. Single Cell-to-C _T Kit har tagit itu med vart och ett av dessa potentiella problemområden för att skapa en lösning som möjliggör tillförlitlig och robust genuttrycksanalys från enstaka celler med maximal känslighet. Detektering av enstaka cellekvivalenter med hjälp av Single Cell-to-C _T Kit visar lämplig linjäritet och känslighet för qPCR-resultat jämfört med en 100-cells provkontroll med utmärkt teknisk reproducerbarhet. Som förväntat uppvisar enskilda enstaka celler större variation på grund av inneboende biologisk heterogenitet. Dessutom, genom inkludering av ett cDNA-pre-amplifieringssteg, amplifieras mål av intresse noggrant före realtids-PCR. Detta kritiska steg ökar signalen på ett opartiskt sätt, vilket utökar analyspotentialen för begränsade prover. Noggrannheten och signalförstärkningen av en 96-generspanel som använder pre-amplifiering visas.

Överlägsen prestanda och reproducerbarhet jämfört med alternativa metoder

Traditionella provberedningsmetoder som använder organiska lösningsmedel, glasfiberfilter eller magnetiska pärlor är inte lämpliga för encellsanalys på grund av förlust av prov genom ofullständig RNA-utfällning, bindning och eluering. Dessutom saknar de flesta encelliga hembryggningsmetoder som involverar enkel kokning för att lysera celler förmågan att inaktivera endogena RNaser för att stabilisera genuttrycksprofiler och kan resultera i kemisk klyvning av RNA och inhibitoröverföring, inklusive gDNA-kontamination, vilket kan påverka alla qRT-PCR-applikationer. Däremot visar Single Cell-to-C _T Kit överlägsen känslighet och reproducerbarhet för encellsanalys jämfört med traditionella renings- eller hembryggningsmetoder.

• Föroptimerat arbetsflöde för RT-PCR i realtid från enstaka celler
• Maximal känslighet för encellsanalys
• Överlägsen prestanda och reproducerbarhet jämfört med alternativa metoder
• Komplett kit bekvämlighet och lätt att följa protokoll
• Lämplig för användning med 1-stegs och 2-stegs qRT-PCR
• Mindre farligt, mindre avfall, mindre resurser används