Thermo Scientific™ aminoxyTMTsixplex™ Etikettreagensset

De aminoxyTMTsixplex Etikettreagenser delar en identisk struktur men innehåller olika antal 13C- och 15N-isotoper i massrapportören. Den optimerade märkningsproceduren kan slutföras på en timme. Efter märkning av taggen släcks proverna och rensas upp med HILIC fastfasextraktion före masspektrometrianalys. De sex föreningarna i aminoxyTMTsixplex™ Reagensset har samma massa (dvs. isobar) och kemisk struktur (karbonylreaktiv aminoxigrupp, distansarm och massrapportör). Den specifika fördelningen av 13C- och 15N-isotoper på vardera sidan av HCD- eller ETD MS/MS-fragmenteringsstället i varje reagens resulterar i en unik reportermassa (126-131Da) i lågmassaregionen. Denna uppsättning reporterjoner används för att mäta den relativa förekomsten av märkta molekyler i ett kombinerat (multiplexerat) MS-prov som representerar sex olika behandlingsförhållanden. För glykobiologi MS-applikationer möjliggör reagensen kvantitativ profilering av glykanisoformer och upptäckt av glykanbiomarkörer; de ger förbättrad jonisering av märkta glykaner för ökad känslighet och bättre retention av märkta glykaner genom omvänd fas vätskekromatografi (RPLC). De aminoxyTMT reagenser kan användas för att kvantifiera ett brett spektrum av biologiskt viktiga molekyler inklusive kolhydrater, steroider eller oxiderade proteiner.

Drag:
•Kvantitativ —möjliggör relativ kvantifiering av glykaner eller andra karbonylhaltiga biomolekyler från flera prover härledda från celler, vävnader eller biologiska vätskor
•Stabil —oximbindning och produkter som bildas genom märkningsreaktion är stabila och kräver inte ett ytterligare reduktionssteg
•Effektiv —uppnå märkningseffektivitet över 90 % på en timme
•Känslig —20-faldig ökning av signal-till-brus jämfört med omärkt nativ glykan MS-analys
•Flerfaldig— kunna identifiera och karakterisera upp till sex prover samtidigt
•Optimerad —procedur och reagens optimerade för utmärkt märkningseffektivitet och återvinning av glykaner

Inkluderar:
•Etikettreagensset innehåller tillräckligt aminoxyTMT taggar för fem sexplexexperiment

Kräver:
•PNGas F (eller PNGas A) glykosidas och vatten Oasis™ HLB-kolumner

Applikationer:
•Multiplexa upp till 6 olika prover samtidigt i ett enda experiment
• Relativ kvantifiering av glykaner
• Studie av strukturell mångfald av proteinglykosylering
• Studie av glykosylering i cellsignalering och reglering
• Studie av cancerprogression, upptäckt av biomarkörer och analys av bioterapeutika

Inhemska glykaner är svåra att studera med masspektrometri på grund av deras dåliga joniseringseffektivitet. Kvantifiering av glykaner är särskilt utmanande på grund av bristen på standarder för alla naturligt förekommande glykaner och svårigheter att reproducerbart kvantifiera flera prover. Aminoxigruppen har bättre reaktivitet med karbonyler och bättre stabilitet hos den märkta produkten jämfört med hydrazider. Märkning med aminoxyTMT reagenser förbättrar joniseringen av glykaner, vilket förbättrar känsligheten och möjliggör relativ kvantifiering av glykaner för upp till sex prover samtidigt.

Dessa produkter är föremål för en etikettlicens för begränsad användning.