Invitrogen™ BACE1 (β -Sekretas) FRET Assay Kit, röd

BACE1 (β -sekretas) är ett nyckelenzym som är involverat i produktionen av amyloid beta-peptider (Abeta) som finns i extracellulära amyloidplack av Alzheimers sjukdom (AD). I vissa fall kan tidig debut av familjär AD tillskrivas en svensk mutation i amyloidprekursorproteinet (APP), vilket dramatiskt förbättrar klyvningen av detta protein av BACE1. Detta och andra genetiska och patologiska bevis har lett till terapeutiska tillvägagångssätt som fokuserar på hämning av BACE1 och andra APP-klyvande enzymer, såsom gamma-sekretas. BACE1 fluorescensresonansenergiöverföring (FRET) Assay Kit tillhandahåller en känslig och effektiv metod för att screena potentiella BACE1-hämmare. Detta kit använder renat baculovirus-uttryckt BACE1 och ett nytt rött FRET-peptidsubstrat baserat på den svenska mutanten.

BACE1 FRET Assay Kit erbjuder:

Röd emission för att minska sammansatt interferens

Excitation vid 545 nm och avläst emission vid 585 nm

En lättanvänd, snabb, homogen analys som utförs i lösning

Mångsidig formatering för screening med hög genomströmning

Stabila —resultatmätningar kan göras i upp till 24 timmar

. Principen för BACE1 FRET-analysen är som följer: Peptidsubstratet syntetiseras med två fluoroforer, en fluorescerande donator (ett rhodamin- (Rh)-derivat) och en proprietär släckningsacceptor. Avståndet mellan dessa två grupper har valts så att vid ljusexcitation släcks donatorns (D) fluorescensenergi avsevärt av acceptorn (A) genom ett kvantmekaniskt fenomen känt som resonansenergiöverföring (Figur 1). Vid klyvning av proteaset separeras fluoroforen från den släckande gruppen, vilket återställer det fulla fluorescensutbytet för donatorn. Således blir ett svagt fluorescerande peptidsubstrat starkt fluorescerande vid enzymatisk klyvning; ökningen av fluorescens är linjärt relaterad till proteolyshastigheten.

Källa till BACE1 enzym:
En cDNA-sekvens som kodar för aminosyrorna 1-460 av human BACE1, motsvarande ektodomänen, uttrycktes i rekombinanta, bakulovirusinfekterade insektsceller. Renad BACE1 existerar som proBACE1-formen med en skenbar molekylvikt av 55 kDa och en N-terminal sekvens av TQHGIRLPLR.