Invitrogen™ BLOCK-iT™ HiPerform™ Lentiviralt Pol II miR RNAi uttryckssystem med EmGFP

De BLOCK-iT™ Pol II miR RNAi Expression Vector Kits kombinerar fördelarna med traditionella RNAi-vektorer (stabilt uttryck och förmågan att använda virustillförsel) med kapacitet för vävnadsspecifikt uttryck och multipla mål knockdown från samma transkript. De BLOCK-iT™ Pol II miR RNAi Expression Vector Kits och BLOCK-iT™ Lentivirala Pol II miR RNAi-expressionssystem är designade för att uttrycka artificiella miRNA som är konstruerade för att ha 100 % homologi med din målsekvens och kommer att resultera i målklyvning. Använder ’Invitrogens prisbelönta BLOCK-iT™ RNAi Designer, över 70% av konstruktionerna producerar mer än 70% knockdown. De Invitrogen Pol II uttrycksfamilj av vektorer inkluderar:

– Starkt uttryck från CMVs omedelbara tidiga promotor, med möjlighet att använda EF-1α vävnadsspecifika promotorer eller andra promotorer via MultiSite Gateway™ rekombination.
– Kompatibilitet med många av ’Invitrogen s Gateway™ destinationsvektorer (DEST) för genuttryck.

– Förmåga att kontrollera initieringen av RNAi-svaret med en ny BLOCK-iT™ Inducerbar Pol II miR RNAi Expression Vector Kit w/EmGFP (kat. nr. K493900).
– En ny destinationsvektor i BLOCK-iT™HiPerform™ Lentiviralt PolII miR RNAi uttryckssystem med EmGFP. Den nya vektorn innehåller en mRNA-stabiliserande sekvens (WPRE) och en nukleär importsekvens (cPPT) som genererar upp till 5 gånger högre virustitrar och EmGFP-expressionsnivåer. Dessutom uttrycks blasticidinresistens från mus-PGK-1-promotorn för att undvika avstängning efter flera passager.

– Samcistroniskt uttryck av Emerald GFP (EmGFP), vilket resulterar i korrelation av EmGFP-uttryck med knockdown från din miR RNAi.

–Uttryck av mer än en konstruerad miR RNAi
-sekvens på samma transkript, vilket möjliggör knockdown av flera gener samtidigt och generering av syntetiska fenotyper.
BLOCK-iT™ Inducerbar Pol II miR RNAi Expression Vector Kit med EmGFP ger möjligheten att reglera RNAi-experiment. Detta kit innehåller pT-REx-DEST30 Gateway™ vektor som efter enkla klonings- och skytteltekniker producerar en miR RNAi-expressionsvektor som är lämplig för inducerbar knockdown. pT-REx-DEST30 Gateway™ vektorn innehåller CMV-promotom med två kopior av tetracyklinoperatorsekvensen (tetO2) som tillåter högnivå och reglerad expression. Detta tillåter studiet av förlust av funktion i en stabilt transfekterad cellinje även om genen av intresse är väsentlig. Dessutom kan induktion av miR RNAi-uttryck stoppas så att fenotypiska förändringar kan mätas under återhämtning av genfunktion.

För en mängd olika uttrycksalternativ kan miR RNAi-kassetten, som innehåller EmGFP (endast ™pcDNA 6.2-GW/EmGFP-miR-vektor), miR-flankerande regioner och en miRNA som är homolog med målet av intresse, lätt flyttas till en mängd olika DEST-vektorer. Detta sker genom Gateway™ rekombinationsreaktioner där miR RNAi-kassetten överförs till en pDONR™ vektor (BP-reaktion) och sedan in i en valfri DEST-vektor (LR-reaktion). De HiPerform™ systemet har det nya pLenti6.4/R4R2/V5-DEST vektor för höga virustitrar och EmGFP-uttryck.