Invitrogen™ BODIPY™ 493/503 NHS Ester (succinimidylester)

BODIPY™ 493/503 färgämne är ljust, grönt fluorescerande färgämne med liknande excitation och emission till fluorescein (FITC) eller Alexa Fluor™ 488 färgämne. Den har en hög extinktionskoefficient och fluorescenskvantutbyte och är relativt okänslig för lösningsmedelspolaritet och pH-förändringar. I motsats till de mycket vattenlösliga fluoroforerna Alexa Fluor™ 488 färgämne och fluorescein (FITC), BODIPY™ färgämnen har unika hydrofoba egenskaper idealiska för färgning av lipider, membran och andra lipofila föreningar. BODIPY™ 493/503 färgämne har en relativt lång livstid i exciterat tillstånd (typiskt 5 nanosekunder eller längre), vilket är användbart för fluorescenspolarisationsbaserade analyser och ett stort tvåfoton-tvärsnitt för multifotonexcitation. Förutom reaktiva färgämnen erbjuder vi BODIPY™ 493/503 färgämne konjugerat till en mängd olika antikroppar, peptider, proteiner, spårämnen och amplifieringssubstrat optimerade för cellulär märkning och detektion.

NHS-estern (eller succinimidylestern) av BODIPY™ 493/503 är det mest populära verktyget för att konjugera färgämnet till ett protein eller en antikropp. NHS-estrar kan användas för att märka de primära aminerna (R- _NH2 ) av proteiner, aminmodifierade oligonukleotider och andra amininnehållande molekyler. Det resulterande BODIPY™ 493/503-konjugat uppvisar ljus fluorescens, smala emissionsbandbredder och relativt långa livstider i exciterat tillstånd, vilket kan vara användbart för fluorescenspolarisationsanalyser och två-fotonexcitationsmikroskopi (TPE).

Detta reaktiva färgämne innehåller en _C3- alkyldistans mellan fluoroforen och NHS-estergruppen. Denna spacer hjälper till att separera fluoroforen från dess fästpunkt, vilket potentiellt minskar interaktionen mellan fluoroforen och biomolekylen till vilken den är konjugerad.

Detaljerad information om detta BODIPY™ 493/503 NHS ester:

Fluoroforetikett: BODIPY™ 493/503 färgämne
Reaktiv grupp: NHS-ester (succinimidylester)
Reaktivitet: Primära aminer på proteiner och ligander, aminmodifierade oligonukleotider
Ex/Em av konjugatet: 500/509 nm
Extinktionskoefficient: 79 000 cm-1M-1
Molekylvikt: 417,22

Typisk konjugationsreaktion
Aminreaktiva reagens kan konjugeras med praktiskt taget vilket protein eller vilken peptid som helst; det medföljande protokollet är optimerat för IgG-antikroppar. Reaktionen kan skalas för vilken mängd protein som helst, men koncentrationen av proteinet bör vara minst 2 mg/ml för optimala resultat. Vi rekommenderar att du provar tre olika grader av märkning, med tre olika molförhållanden mellan det reaktiva reagenset och proteinet.

De BODIPY™ NHS-ester löses vanligtvis i högkvalitativ vattenfri dimetylformamid (DMF) eller dimetylsulfoxid (DMSO), och reaktionen utförs i 0,1-0,2 M natriumbikarbonatbuffert, pH 8,3, vid rumstemperatur under 1 timme. Eftersom pKa för den terminala aminen är lägre än den för lysinepsilon-aminogruppen, kan du uppnå mer selektiv märkning av aminterminalen med en buffert närmare neutralt pH.

Konjugatrening
Märkta antikroppar är vanligtvis separerade från fria BODIPY™ färg med hjälp av en gelfiltreringskolonn, såsom Sephadex™ G-25, BioGel™ P-30 eller motsvarande. För mycket större eller mindre proteiner, välj ett gelfiltreringsmedium med en lämplig molekylviktsgräns eller rena genom dialys. Vi erbjuder flera reningssatser optimerade för olika mängder antikroppskonjugat:
Antikroppskonjugatreningskit för 0,5-1 mg (A33086)
Antikroppskonjugatreningskit för 20-50μ g (A33087)
Antikroppskonjugatreningskit för 50-100μ g (A33088)

Lär dig mer om protein- och antikroppsmärkning
Vi erbjuder ett brett urval av Molecular Probes™ antikropps- och proteinmärkningssatser för att passa ditt startmaterial och din experimentuppställning. Se våra antikroppsmärkningssatser eller använd vårt Labeling Chemistry Selection Tool för andra val. För att lära dig mer om våra märkningssatser, läs Kit för märkning av proteiner och —nukleinsyror avsnitt 1.2 i Molecular Probes™ Handbok.

Vi ’gör ett anpassat konjugat åt dig
Om du ’inte hittar det du ’letar efter i vår onlinekatalog, kommer vi att ’förbereda en anpassad antikropp eller proteinkonjugat åt dig. Vår tjänst för anpassad konjugering är effektiv och konfidentiell, och vi står för kvaliteten på vårt arbete. Det är vi ISO 13485:2000 certifierad.