Invitrogen™ CellEvent™ Caspase-3/7-detektionsreagenser

Funktioner hos dessa indikatorer inkluderar:

• Optimerat caspase-3/7-substrat för apoptosanalys
• Lättanvänd—att lägga till och läsa; ingen celllysis krävs
• Används för mätning av tidskurs; Välj enkelt den intressanta tidpunkten
• Kompatibel med både levande cellfluorescensavbildning och formaldehydbaserade fixeringsmetoder
• Multiplexaktiverad—kombinera med andra fluorescerande reagenser för att bekräfta apoptos i samma cell eller cellpopulation

CellEvent™ Caspase-3/7 Green Detection Reagens: Absorptions-/emissionsmaximum på ∼502/530 nm. Detekterbar med FITC/GFP traditionellt filterset.

CellEvent™ Caspase-3/7 röd detektionsreagens: Absorptions-/emissionsmaximum på ∼590/610 nm. Detekterbart med traditionellt Texas rödfilter.

CellEvent™ Caspase-3/7 Red Detection Reagens och CellEvent™ Caspase-3/7 Green tillhandahålls som torkpulver. Tillsätt bara 100 μl PBS för att torka ner pulvret och skapa 100X fondlösning. Späd ut denna 100-gångiga lösningslösning 1:100 i komplett medium och färga celler i 30–60 minuter och analysera med fluorescensmikroskop.

CellEvent™ Caspase-3/7 Green Detection Reagent tillhandahålls också som en redan förberedd DMSO-lösning. DMSO-lösningen är en 400X standardlösning som är redo att användas. Späd bara ut i tillväxtmedium 1:400 och färga cellerna i 30 till 60 minuter.

För att förhindra att de apoptotiska cellerna sköljs bort behövs ingen tvätt i slutet av staning. Färgade celler kan analyseras levande eller fixeras med 4 % paraformaldehydlösning såsom Image-IT™ paraformaldehyd i 0,1 m fosfatbuffert pH 7,4, Kat. Nr. I28800. Dessa fasta celler kan vidarebearbetas för ICC-arbetsflödet.

Substratspecifika egenskaper

CellEvent Caspase-3/7 Detection Reagents är en fyraminosyrapeptid (DEVD) konjugerad till ett nukleinsyrabindande färgämne. DEVD-peptidsekvensen är en klyvningsplats för caspas-3/7, och det konjugerade färgämnet är icke-fluorescerande tills det klyvs från peptiden och binds till DNA.

Verkningsprinciper

CellEvent Caspase-3/7 Green Detection Reagent är i grunden icke-fluorescerande eftersom DEVD-peptiden hämmar färgämnets förmåga att binda till DNA. Efter aktivering av caspas-3/7 i apoptotiska celler klyvs dock DEVD-peptiden, vilket gör att färgämnet kan binda till DNA och producera ett ljust, fluorogent svar.

Enkelt trestegsprotokoll

För att använda CellEvent Caspase 3/7 Detection Reagens, tillsätt det helt enkelt i cellerna, inkubera 30 ––60 minuter och visualisera. Apoptotiska celler med aktiverad kaspas-3/7 har klara gröna eller röda kärnor, medan celler utan aktiverad kaspas 3/7 har minimal fluorescerande signal.

Analysens mångsidighet möjliggör detektion och fixering av levande celler

Denna robusta analys möjliggör undersökning av caspas-3/7-aktivering i levande celler. Dessutom, eftersom tvättsteg inte är nödvändiga för upptäckt, bevaras sköra apoptotiska celler som vanligtvis förloras under tvättstegen. Viktigt är att den fluorescerande signalen från CellEvent Caspase 3/7 Detection Reagent kan överleva fixering och permeabilisering. Detta möjliggör flexibilitet att utföra slutpunktsanalyser och undersöka andra proteiner av intresse med hjälp av immunocytokemi.