Invitrogen™ CellEvent™ Caspase-3/7-detektionsreagenser

Funktioner hos dessa indikatorer inkluderar:
• Optimerat kaspas-3/7-substrat för apoptosanalys
• Lätt att —använda lägga till och läsa; ingen cellys krävs
• Använd för tidsförloppsmätningar; enkelt välja tidpunkten av intresse
• Kompatibel med både levande cell fluorescens-avbildning och formaldehyd-baserade fixeringsmetoder
• Multiplex aktiverad kombinera —med andra fluorescerande reagenser för att bekräfta apoptos i samma cell eller cellpopulation

CellEvent™ Caspase-3/7 Green Detection Reagent : Absorptions-/emissionsmaxima för∼ 502/530 nm. Detekterbar med FITC/GFP traditionell filterset.

CellEvent™ Caspase-3/7 Red Detection Reagent : Absorptions-/emissionsmaxima för∼ 590/610 nm. Detekterbar med traditionell Texas röd filterset.

CellEvent™ Caspase-3/7 Red Detection Reagent and CellEvent™ Caspase-3/7 Green tillhandahålls som torrt pulver. Tillsätt bara 100 μL PBS för att torka ner pulver för att generera 100X stamlösning. Späd denna 100X stamlösning 1:100 i komplett media och färga celler i 30-60 minuter och analysera med fluorescensmikroskop.

CellEvent™ Caspase-3/7 Red Detection Reagent tillhandahålls också som redan beredd DMSO-lösning. DMSO-lösning är 400X stamlösning, som är redo att användas. Späd bara i tillväxtmedium 1:400 och färga cellerna i 30 till 60 minuter.

För att förhindra att de apoptotiska cellerna sköljs bort behövs ingen tvättning i slutet av staningen. Färgade celler kan analyseras levande, eller kan fixeras med 4% paraformaldehydlösning som t.ex. Image-IT™ Paraformaldehyd 4 % i 0,1 M fosfatbuffert pH 7,4, kat. Inga. I28800. Dessa fasta celler kan bearbetas ytterligare för ICC-arbetsflöde.

Substratspecifikationer
CellEvent Caspase-3/7-detektionsreagens är en peptid med fyra aminosyror (DEVD) konjugerad till ett nukleinsyrabindande färgämne. DEVD-peptidsekvensen är ett klyvningsställe för kaspas-3/7, och det konjugerade färgämnet är icke-fluorescerande tills det klyvs från peptiden och binds till DNA.

Handlingsprinciper
CellEvent Caspase-3/7 Green Detection Reagent är i sig inte fluorescerande eftersom DEVD-peptiden hämmar färgämnets förmåga att binda till DNA. Efter aktivering av kaspas-3/7 i apoptotiska celler spjälkas emellertid DEVD-peptiden, vilket gör det möjligt för färgämnet att binda till DNA och producera ett ljust, fluorogent svar.

Enkelt trestegsprotokoll att
använda CellEvent Caspase 3/7 Detection Reagent, lägg det helt enkelt till cellerna, inkubera 30 –60 minuter och visualisera. Apoptotiska celler med aktiverat kaspas-3/7 kommer att ha ljusgröna eller röda kärnor, medan celler utan aktiverat kaspas 3/7 kommer att ha minimal fluorescerande signal.

Analysens mångsidighet möjliggör upptäckt och fixering av levande celler.
Denna robusta analys möjliggör undersökning av kaspas-3/7-aktivering i levande celler. Dessutom, eftersom tvättsteg inte är nödvändiga för detektion, bevaras ömtåliga apoptotiska celler som typiskt går förlorade under tvättstegen. Viktigt är att den fluorescerande signalen från CellEvent Caspase 3/7 Detection Reagent kan överleva fixering och permeabilisering. Detta möjliggör flexibiliteten att utföra slutpunktsanalyser och sondera för andra proteiner av intresse med hjälp av immuncytokemi.