Invitrogen™ CellEvent™ Senescence Green Detection Kit

Denna fluoresceinbaserade sond innehåller två galaktosidgrupper, vilket gör den till ett mål förβ -galaktosidas. Aktivering avβ -galaktosidas används vanligtvis som en biomarkör för åldrande celler. Detta hydrolasenzym finns i lysosomer och omvandlasβ -galaktosider till monosackarider under sura pH-förhållanden. Den enzymatiskt klyvda produkten hålls kvar i cellen på grund av kovalent bindning av intracellulära proteiner och avger en fluorogen signal som har absorptions-/emissionsmaxima på 490/514 nm.

Kitets funktioner inkluderar:
•Pålitlig och snabb fluorescerande detektering av åldrande celler
• Större känslighet än traditionell kolorimetrisk x-gal
• Fluorescerande signal bibehålls väl och detekteras med standard Alexa Fluor™ 488/FITC filterset
• Multiplex-—aktiverad fluorescerande senescensprob kan multiplexeras

På grund av en begränsad replikativ livslängd går normala celler in i cellcykelstopp, även känt som cellulär senescens. Medan i denna åldrande fas förblir cellerna metaboliskt aktiva utan att genomgå celldöd eller delning. De antar en specifik fenotyp som inkluderar uppkomsten av flera kärnor, ökad vakuolisering, uttryck av pH-beroendeβ -galaktosidas, och morfologisk förstoring och förlängning. Åldrande, genom en mängd olika mekanismer, kan spela en roll i tumörsuppression, tumörprogression, åldrande och vävnadsreparation.

Aktivering avβ -galaktosidas används vanligtvis som en biomarkör för åldrande celler. Detta hydrolasenzym finns i lysosomer och omvandlasβ -galaktosider till monosackarider under sura pH-förhållanden. Aktiviteten är optimal vid lysosomalt pH 4, men konventionella analyser mäter vid pH 6. Det har visat sig att normaliseratsβ -galaktosidasaktiviteten är dubbelt så hög i åldrande celler som i pre-senescenta celler oavsett pH-värdet som används för testning.

Ett kolorimetriskt substrat förβ -galaktosidas, 5-brom-4-klor-3-indolyl-β -D-galaktopyranosid (x-gal), har länge använts för att detektera metabolisk aktivitet i celler in vitro. Dess användning är dock begränsad på grund av inkonsekvent signal, analysens längd och oförmåga att multiplexa.

Därför har vi utvecklat ett känsligt, fluorescerande substrat förβ -galaktosidas som kan användas för detektion av åldrande celler. De CellEvent™ Senescence Green probe är ett fluoresceinbaserat reagens som innehåller två galaktosidgrupper, vilket gör det till ett specifikt mål förβ -galaktosidas. Den enzymklyvda produkten hålls kvar i cellen på grund av kovalent bindning av intracellulära proteiner och avger en fluorogen signal som har absorptions-/emissionsmaxima på 490/514 nm.

De CellEvent™ Senescent Green Kit ger CellEvent™ Åldrande grön sond och en optimerad buffert för detektion av åldrande celler i fixerade prover. Denna sond kan multiplexeras med andra fluorescerande reagens som är kompatibla med paraformaldehydfixering.