Thermo Scientific™ CellSensor™ AP-1- bla A375 cellinje

De CellSensor™ AP1-bla A375-cellinjen innehåller en beta-laktamasreportergen under kontroll av AP1-svarselementet stabilt integrerat i A375-celler. A375-celler är humana melanomcancerceller som innehåller den endogena B-Raf-mutationen V600E, vilket resulterar i konstitutiv B-Raf-kinasaktivitet. De CellSensor™ AP1-bla A375-cellinjen är en klonal population isolerad med flödescytometri baserad på konstitutivt uttryck av betalaktamas.

Denna cellinje har validerats med olika småmolekylära Raf-hämmare såväl som B-Raf Stealth RNAi™ siRNA. Denna cellinje har också testats för analysprestanda under varierande förhållanden, inklusive DMSO-koncentration, cellantal, föreningsinkubationstid och substratladdningstid och validerats för Zfi-faktor och IC50-koncentrationer av Raf1 Inhibitor I. RAF-genfamiljen (RAF1, A-RAF och B-RAF) kodar för närbesläktade serin/treoninproteinkinaser som är viktiga effektorer av Ras-aktivering. Raf1 och A-Raf är sällan muterade, medan mutationer i B-Raf är vanliga i humana cancerformer, särskilt melanom. B-Raf är muterad i cirka 70 % av humana melanom, 35-70 % av papillära sköldkörtelkarcinom och mindre vanligt i lung- och kolorektala karcinom. Mutationer är mestadels i B-Raf-kinasdomänen och, i melanom, är de allra flesta V600E-missense-mutationer som leder till aktivering av B-Raf-kinas. Den konstitutiva aktiviteten hos B-Raf V600E kan direkt leda till aktiveringen av Mek/MAPK-signalvägen. Därför kan hämning av B-Raf/Mek/MAPK-signalering vara ett potentiellt sätt att behandla melanom och andra tumörer med mutant B-Raf.