Thermo Scientific™ CellSensor™ irf1- bla Ba/F3 cellinje

Jak/Stat-signaleringsvägar spelar viktiga roller i cellulära svar på distinkta cytokiner. En av Jak/Stat-vägarna, Jak2/Stat5, förmedlar cellproliferation som svar på Interleukin-3 (IL-3), prolaktin, erytropoietin (Epo) och granulocyt - makrofagkolonistimulerande faktor (GM-CSF). JAK2-genknockout orsakar embryonal dödlighet på grund av defekt erytropoes, vilket tyder på att Jak2/Stat5-vägen spelar en viktig roll i bildandet av röda blodkroppar. Den senaste upptäckten av en aktiverande mutation i JAK2 (V617F) som finns hos en hög andel av patienter med myeloproliferativ sjukdom (MPD) tyder på att Jak2/Stat5-vägen kan vara ett potentiellt terapeutiskt mål för vissa former av MPD. Den aktiverade Stat5-transkriptionsfaktorn känner igen och binder till en specifik palindromisk DNA-sekvens som finns i promotorregionen avβ -kasein, interferon regulatorisk faktor-1 (irf-1) och ett antal andra gener.

De CellSensor™ irf1-bla BA/F3-cellinje innehåller en beta-laktamasreportergen under kontroll av irf-1-svarselementet stabilt integrerat i BA/F3-celler. Denna cellinje är validerad för EC50 och Z'-faktor under optimerade förhållanden med användning av mus IL-3 (mIL-3). Denna cellinje har också testats under varierande experimentella förhållanden, inklusive DMSO-koncentration, cellantal, stimuleringstid och substratladdningstid. Responsen på Jak Inhibitor 1, en hämmare av små molekyler, testades också. CellSensor™ irf1-bla BA/F3-celler behandlades med mIL-3 i tre exemplar över det angivna koncentrationsintervallet i ett format med 384 brunnar. Celler inkuberades under 5 timmar. med mIL-3-agonist i 0,5 % DMSO och sedan kombinerad med LiveBLAzer™ -FRET B/G-substrat (CCF4-AM) i 2,5 timmar. Fluorescensemissionsvärden vid 460 nm och 530 nm erhölls med användning av en standard fluorescensplattläsare. Svarsförhållandena för varje replikat plottades mot de angivna koncentrationerna av mIL-3. CellSensor™ irf1-bla BA/F3-celler behandlades med Jak Inhibitor 1 under 30 minuter över det angivna koncentrationsintervallet i ett 384-brunnars format. Celler inkuberades sedan med mIL-3-agonist i 0,5 % DMSO under 5 timmar. och sedan kombineras med LiveBLAzer™ - FRET B/G-substrat (CCF4-AM) i 2,5 timmar. Fluorescensemissionsvärden vid 460 nm och 530 nm erhölls med användning av en standard fluorescensplattläsare. Emissionsförhållandena plottades mot de angivna koncentrationerna av Jak Inhibitor 1. Akademiska och ideella kunder, vänligen fråga efter specialpriser.