Thermo Scientific™ CellSensor™ T-REx™ FOXO3 DBE- bla HeLa Cell Line

De CellSensor™ T-REx™ FOXO3 DBE- bla HeLa cellinje konstruerades genom lentiviral transduktion av HeLa livmoderhalscancerceller med ett FOXO3-svarselement som driver beta-laktamasuttryck (DBE- bla ), tillsammans med en tetracyklinrepressor och tetracyklin (eller tetracyklinanalogen doxycyklin)-inducerbara FOXO3-konstruktioner. Tillsats av doxycyklin till dessa celler möjliggör FOXO3-transkriptionsfaktoruttryck och efterföljande beta-laktamasuttryck, vilket i sin tur kan nedregleras genom insulinmedierad aktivering av PI3K/AKT-signalvägen som leder till fosforylering och inaktivering av FOXO3 och samtidigt undertryckande av beta-laktamasuttryck. Denna cellinje har testats för robust analysprestanda genom att utvärdera en mängd olika analysparametrar, inklusive: cellpläteringsnummer, DMSO-tolerans, stimuleringstid och substratladdningstid. Assayvalidering utfördes med användning av serieutspädningar av insulin för att antagonisera doxycyklin-inducerad FOXO3-aktivitet (Figur 1). Ytterligare testdata med RNAi och alternativa stimuli finns också tillgängliga.