Invitrogen™ CellTrace™ Blue Cell Proliferation Kit, för flödescytometri

De CellTrace Blått reagens är specifikt designat för excitation av en UV-laser (vid 355 nm eller 375 nm), och det kan enkelt multiplexeras med reagenser och antikroppar som exciteras av andra vanligt använda lasrar.

• Överlägsen —prestanda ljus, single-peak färgning möjliggör visualisering av flera generationer
• Långsiktig signalstabilitet —bibehålls väl i celler i flera dagar efter färgning
• —Mångsidiga flera färger tillgängliga för att enkelt kombineras med antikroppar eller markörer för cellfunktion, såsom GFP
• Enkelt, robust

färgningsprotokoll Överlägsen fluorescerande färgning
Framgångsrik proliferationsanalys genom färgspädning (se figur nedan) kräver ett extremt ljust färgämne för att skilja fluorescerande märkta celler från autofluorescens efter flera celldelningar. Den intensiva fluorescerande färgningen som tillhandahålls av CellTrace Blå färg möjliggör visualisering av fem eller fler generationer av prolifererande celler innan signalen överväldigas av inre cellulär autofluorescens. Konsekvent, homogen färgning resulterar i mycket liten fluorescensvariation mellan celler i en population, så distinkta generationer kan ses utan något krav på komplex modelleringsprogramvara. Den rekommenderade arbetskoncentrationen för perifera mononukleära blodceller är 5 10–μ M. Men som med alla reagens som används i flödescytometri, för att uppnå optimal signal, rekommenderas reagenstitrering starkt.

Långvarig signalretention
Till skillnad från fläckar som märker cellernas lipidmembran, CellTrace Blå färg passerar lätt plasmamembranet och binder kovalent inuti celler där det stabila, välbehållna fluorescerande färgämnet ger en konsekvent signal, även efter flera dagar i en cellodlingsmiljö. CellTrace Blått färgämne binder kovalent till alla fria aminer på ytan och insidan av celler och visar liten cytotoxicitet, med minimal observerad effekt på cellernas proliferativa förmåga eller biologi.

Enkel multiplexering med andra fluoroforer
UV-excitationen och den smala emissionen av CellTrace Blå färg gör den idealisk för multiplexering eftersom den ligger utanför de spektrala emissionsprofilerna för de flesta andra färgämnen och fluorescerande proteiner.

Enkelt, robust färgningsprotokoll
The CellTrace Blue Cell Proliferation Kit innehåller praktiska engångsflaskor med torr färg för att möjliggöra småskaliga experiment utan att förbereda överflödiga mängder färgämne. En stamlösning framställs genom att lösa innehållet i en flaska i vattenfri DMSO före användning. För att färga 1 ml celler i proteinfritt medium, 1μ L av denna stamlösning används vanligtvis. Cellerna ska färgas i 20 minuter vid rumstemperatur med försiktig omrörning. En kort tvätt med komplett medium kommer sedan att släcka eventuellt kvarvarande färgämne i lösningen.