Invitrogen™ Click-iT™ Plus TUNEL-analyssatser för in situ-apoptosdetektion

De Click-iT Plus TUNEL Alexa Fluor 488, 594 och 647 analyser för in situ apoptosdetektion kan detektera apoptotiska celler i vävnads- och odlade cellprover genom inkorporering av en liten, mycket specifik märkningsdel och ett ljust fluorescerande färgämne. Efter inkorporering av märkningsdelen i DNA-fragment uppnås detektion genom en katalyserad ''klick''-reaktion med förhållanden milda nog för att bevara den emitterade fluorescerande signalen från GFP eller RFP.

Andra fördelar med Click-iT Plus TUNEL-analys för in situ apoptosdetektion inkluderar:
•Optimerad för detektion av apoptotiska celler i antingen vävnads- eller cellprov
• Multiplex —aktiverad optimerad för att fungera med fluorescerande färgämnen eller proteiner som GFP och RFP
• Förbättrad TUNEL-—analys bättre märkningsinkorporering på grund av liten reaktiv del
• Ljusa apoptotisk —signal använder Alexa Fluor färgämnen, vilket resulterar i en stabil, icke-fotoblekande fluorescerande signal
• Flexibilitet —analysen kan konfigureras för att testa 1 –50 prover åt gången

Fragmentering av cellulärt DNA är ett kännetecken för apoptos. TUNEL-analysen är den mest använda metoden för att detektera fragmenterat DNA i apoptotiska celler eller vävnadsprover. TUNEL-analysen börjar med inkorporering av modifierad dUTP vid 3'-OH-änden av det fragmenterade DNA:t. dUTP-modifieringen är ofta tillägget av en fluorofor. På grund av storleken på fluoroforen kan den modifierade dUTP visa lägre än förväntade inkorporeringshastigheter, vilket kan påverka känsligheten hos TUNEL-analysen. Dessutom lider många fluoroforer som används i för närvarande tillgängliga TUNEL-analyssatser av fotoblekning och fluorescerande spektrala överlappningsproblem, som båda minskar känsligheten för och förmågan att multiplexa analysen.

De Click-iT Plus TUNEL-analysen utvecklades för att lösa dessa problem. Analysen använder dUTP modifierad med en alkyngrupp (en liten bio-ortogonal funktionell grupp), vilket gör att nukleotiden lättare kan inkorporeras. Efter inkorporering, en mycket specifik klickreaktion mellan alkyngruppen och en Alexa Fluor pikolylazid fluorescerande färgämne, och efterföljande detektion av det färgämnet, resulterar i en känslig och specifik analys för detektion av apoptotiska celler eller vävnadsprover. På grund av dess milda reaktionsförhållanden, Click-iT Plus TUNEL-analysen möjliggör multiplexering med fluorescerande proteiner eller färgämnen.

De Click-iT Plus TUNEL-analysen har validerats med flera olika formalinfixerade paraffininbäddade vävnadstyper. I samtliga fall bevarades dess förmåga att multiplexa med fluorescerande proteiner och färgämnen. Dessutom bevarades också förmågan att färga aktin med fluorescensmärkt falloidin.

De Click-iT Plus TUNEL-analysen innehåller alla reagenser som behövs för att detektera apoptotiska celler från antingen vävnads- eller cellprov. Reagenserna som medföljer detta kit kan användas för att testa 50 prover och kan konfigureras för att testa 1 –50 prover åt gången.