Thermo Scientific™ CloneJET™ PCR Cloning Kit med DH10B Kompetenta celler

• Detta paket inkluderar CloneJET PCR Cloning Kit (20 eller 40 reaktioner) och DH10B Kompetenta celler som är optimerade för användning med kitet och som kan transformeras direkt med ligeringsprodukten

CloneJET PCR Cloning Kit
Ett avancerat positivt urvalssystem för högeffektiv kloning av PCR-produkter som genererats med vilket termostabilt DNA-polymeras som helst. Alla trubbiga eller klibbiga DNA-fragment kan klonas. Satsen fungerar bra med både fosforylerade och icke-fosforylerade DNA-fragment. Ligering in i den inkluderade positiva selektionsvektorn tar bara fem minuter, vilket ger mer än 99 % rekombinanta kloner. Trubbiga PCR-produkter genererade med ett korrekturläsningsenzym ligeras direkt in i kloningsvektorn.

PCR-produkter som genereras antingen med icke-korrekturläsande DNA-polymeraser eller blandningar av DNA-polymeraser måste göras trubbiga före ligering i en fem minuters reaktion med det termostabila DNA Blunting Enzyme som medföljer kitet. DH10B Kompetenta celler är optimerade för användning med detta kit och kan transformeras direkt med ligeringsprodukten.

Innehåller den nya, användningsfärdiga positiva selektionskloningsvektorn pJET1.2/blunt. Vektorn innehåller en letal restriktionsenzymgen som störs genom ligering av en DNA-insättning i kloningsstället. Som ett resultat kan endast bakterieceller med rekombinanta plasmider bilda kolonier. Återcirkulariserade pJET1.2/trubbiga vektormolekyler som saknar ett insert uttrycker ett letalt restriktionsenzym, som dödar värd-E. coli-cellen efter transformation. Denna positiva selektion påskyndar drastiskt processen för koloniscreening och eliminerar ytterligare kostnader som krävs för blå/vit selektion.

• Snabb - PCR-kloning på bara fem minuter
• Högsta effektivitet - 99% av positiva kloner
• Ingen kloningsbakgrund - positiv urvalsvektor
• Mångsidig - idealisk för kloning med trubbiga eller klibbiga ändar
• Ekonomisk - ingen dyr blå/vit skärm

Applikationer inkluderar:

• Kloning av trubbiga eller 3' dA-svansade PCR-produkter upp till 10 kb
• Kloning av DNA-fragment genererade av restriktionsenzymer
• Sekvensering av klonat DNA
• in vitro och in vivo transkription av klonade insättningar från T7-promotorn

DH10B Kompetenta celler
Högeffektiva, kemiskt kompetenta E.coli-celler. De DH10B stam är lämplig för kloning av DNA som innehåller metylcytosin och metyladenin, vilket gör att både prokaryotiskt och eukaryot genomiskt DNA kan klonas effektivt. Dessa celler är idealiska för konstruktion av cDNA-bibliotek med användning av plasmidhärledda vektorer. Genotyp: F– mcrAΔ (mrr-hsdRMS-mcrBC)φ 80lacZ ΔM15Δ lacX74 recA1 endA1 araD139Δ (ara-leu)7697 galU galKλ– rpsL(StrR) nupG.

• Hög transformationseffektivitet:> 1x109 cfu/μ g pUC19 DNA
• Lämplig för rutin- och kloningsapplikationer med hög genomströmning
• Bekväm två reaktioner per injektionsflaska
• SOC Utväxtmedium ingår