Invitrogen™ CyQUANT™ MTT and XTT Cell Viability Assays

Kitet består av två reagenser, XTT-reagens och elektronkopplingsreagens. XTT-reagens används för att bedöma cellviabilitet som en funktion av cellulär redoxpotential, och elektronkopplingsreagenset förbättrar analysens dynamiska omfång.

Analysen är tillräcklig för tio 96-brunnars plattor och består av 10 flaskor XTT-reagens och 10 rör med elektronkopplingsreagens. En flaska av varje (tillräckligt för en platta med 96 brunnar) tinas, blandas, sätts till cellerna och inkuberas. Viabilitetssignalen detekteras med hjälp av en absorbansbaserad mikroplattläsare. I aktivt respirerande livskraftiga däggdjursceller reduceras det vattenlösliga XTT-reagenset och omvandlas till en orangefärgad formazanprodukt.

Funktioner av CyQUANT™ XTT Cell Viability Assay inkluderar:
•Mycket reproducerbar, absorbansbaserad viabilitetsanalys
• Förbättrat dynamiskt område och känslighet jämfört med andra kolorimetriska viabilitetsanalyser
• Enkelt blanda-och-läs-format, konfigurerat för en 96-brunnars platta åt gången
• Icke-toxisk, kontinuerlig analys —flera tidpunkter kan samlas in, ingen cellys

Att mäta förändringar i cellviabilitet är en grundläggande metod för att bedöma cellhälsa, bestämma genotoxicitet och utvärdera läkemedel mot cancer. Förutom att vara kostnadseffektiva genererar kolorimetriska livsduglighetsanalyser konsekventa resultat med låg variabilitet från brunn till brunn. Till skillnad från andra kommersiellt tillgängliga kolorimetriska däggdjurscellviabilitetsanalyser visar XTT-baserade analyser ett högt dynamiskt område och låg variabilitet. Förutom förbättrad prestanda är analysen en kontinuerlig analys och kräver ingen cellys eller solubilisering.

De CyQUANT™ XTT Cell Viability Assay är ett komplett och optimerat kit för detektering av däggdjurscellviabilitet. Analyssatsen innehåller XTT-reagens (2,3-bis-(2-metoxi-4-nitro-5-sulfofenyl)-2H-tetrazolium-5-karboxanilid) och elektronkopplingsreagens. XTT-reagenset, som är en tetrazoliumbaserad förening, är känslig för cellulär redoxpotential och omvandlas i närvaro av aktivt andande celler från en vattenlöslig förening till en orangefärgad formazanprodukt. Analysens känslighet och konsistens ökar avsevärt när den används med elektronkopplingsreagenset.

Eftersom ingen cellys eller solubilisering krävs för detektion, kan XTT-analysen användas som en kontinuerlig analys och flera tidpunkter kan analyseras. Dessutom CyQUANT™ XTT-analysen genererar livskraftsresultat från olika typer av cellinjer, inklusive primära och suspensionsceller.

För varje 96-brunnars platta tinas en flaska XTT-reagens och ett rör med elektronkopplingsreagens, blandas för att skapa en stamlösning och läggs till celler, med cellviabilitet detekterad efter 2 4 –timmars inkubation. Analyskitet tillhandahåller allt material som behövs för tio 96-brunnars plattor.

Det rekommenderas att XTT/Electron Coupling-reagensstamlösningen används strax efter blandning. Analysprestandan försämras och känsligheten reduceras om stamlösningen hålls vid rumstemperatur under längre tidsperioder eller utsätts för cykler av frysning/upptining. För att säkerställa analysprestanda och reproducerbarhet, CyQUANT™ XTT Cell Viability Assay består av separata XTT- och elektronkopplingsreagenser som blandas.