Invitrogen™ DAPI och Hoechst Nukleinsyrafläckar

FluoroPure™ -betyg av Hoechst och DAPI-pulver tillverkas med hjälp av strikta reningsprocesser för att minimera föroreningar som kan störa fluorescensavbildning. Detta säkerställer att DAPI och Hoechst ger tillförlitliga och konsekventa resultat med minimalt bakgrundsljud. De> 98% renhet av FluoroPure Reagenser av kvalitet gör dem särskilt lämpliga för krävande tillämpningar som superupplösningsmikroskopi och levande cellavbildning, där exakt och noggrann visualisering av DNA är avgörande.

DAPI (4',6-Diamidino-2-Fenylindole):

DAPI 4',6-diamidino-2-phenylindole är en blå fluorescerande sond som fluorescerar ljust vid selektiv bindning till den mindre skåran av dubbelsträngat DNA, där dess fluorescens är ungefär 20 gånger större än i det obundna tillståndet. Dess selektivitet för DNA och höga cellpermeabilitet möjliggör effektiv färgning av kärnor med liten bakgrund från cytoplasman och effektiv kontrast i IHC-färgning och rumslig transkriptomik och proteomikvävnadsavbildning. DAPI är en klassisk nukleär motfärgning för immunfluorescensmikroskopi, såväl som en viktig komponent i screeningmetoder med högt innehåll som kräver cellbaserad kvantifiering av DNA-innehåll och segmentering (em/ex 341/452 nm).

DAPI som dilaktatpulver är mer vattenlösligt än dihydrokloridsaltet och därför ett bättre val för att bereda stamlösningar i vatten.

För att göra en 5 mg/ml DAPI-stamlösning (14,3 mM för dihydrokloriden eller 10,9 mM för dilaktatet), lös upp innehållet i en flaska (10 mg) i 2 mL avjoniserat vatten (dH ₂ O) eller dimetylformamid (DMF). Den mindre vattenlösliga DAPI-dihydrokloriden kan ta lite tid att helt lösas upp i vatten och ultraljudsbehandling kan vara nödvändig.

Obs: Inget av dessa DAPI-derivat är särskilt lösligt i PBS för stamlösning.

Späd DAPI stamlösning 1:5000 (eller 1:1000 för 1 mg/ml DAPI 62248) i ultrarent vatten eller PBS (1μ g/ml DAPI). Filtrera arbetslösningen för att ta bort färgämnesaggregat som kan resultera i en punkterad signal.

Hoechst 33342, trihydroklorid, trihydrat och Hoechst 33258, Pentahydrat (bis-bensimid):

Vår Hoechst färgämnen är kända fluoroforer som ofta används för DNA-färgning i både levande och fixerade celler. Med sin exceptionella affinitet och specificitet mot DNA, fungerar dessa färgämnen som utmärkta målinriktningsmedel som kan konjugeras till olika molekyler, vilket gör att de kan kopplas till DNA.

De Hoechst färgämnen inkluderar vanligtvis Hoechst 33258, Hoechst 33342, och Hoechst 34580. Utvecklad av det tyska företaget Hoechst AG i början av 1970-talet har dessa bisbensimidfärgämnen använts i stor utsträckning för DNA-färgning sedan dess.

Upphetsad av UV-ljus, Hoechst färgämnen avger ett brett spektrum av blått ljus. Vid bindning till DNA ökar deras fluorescens cirka 30 gånger, vilket säkerställer ett starkt signal-brusförhållande. Denna fluorescensförbättring är resultatet av undertryckt rotationsrelaxation och hydreringsreduktion vid DNA-bindning (em/ex 360/460 nm).

Hoechst färgämnen är icke-interkalerande, binder specifikt till det mindre spåret av DNA i A –T-rika regioner. Denna unika bindningsmekanism möjliggör exakt och pålitlig DNA-färgning.

Oavsett om du arbetar med levande eller fasta celler, vår Hoechst färgämnen är kompatibla med immunhistokemiapplikationer. Dessutom bindningen av Hoechst 33342 till DNA inducerar minimal cytotoxicitet, vilket säkerställer livskraften för dina celler.

Medan alla tre Hoechst färgämnen har liknande tillämpningar, de har små skillnader i deras egenskaper. Hoechst 33342, till exempel, är betydligt mer cellpermeabelt på grund av tillsatsen av en lipofil etylgrupp, vilket gör den till det föredragna valet för färgning av levande celler. Å andra sidan, Hoechst 34580, med sin dimetylamingrupp istället för fenolen, uppvisar ett förskjutet emissionsmaximum vid 490 nm, jämfört med 461 nm för Hoechst 33258 och Hoechst 33342.

Hoechst 33258, Pentahydrat är även känt som bis-bensimid.

Tillämpning av DAPI och Hoechst Fluorescerande färgämnen:

• DNA-färgning —som vanligtvis används för DNA-färgning i fluorescensmikroskopi och flödescytometri. Den binder till det mindre spåret av dubbelsträngat DNA och avger blå fluorescens när den exciteras av ultraviolett (UV) ljus. Detta gör det möjligt för forskare att visualisera och kvantifiera DNA i celler, vävnader och kärnor.
• Cellcykelanalys används —ofta för att analysera cellcykeln. Genom att färga celler med detta färgämne och använda flödescytometri eller fluorescensmikroskopi kan forskare identifiera och kvantifiera olika faser av cellcykeln, såsom G1, S och G2/M faser. Denna analys ger insikter i cellproliferation, cellcykelprogression och cellcykelavvikelser.
• Nukleär morfologi och kromatinorganisation —studerar kärnmorfologi och kromatinorganisation. Genom att visualisera DNA:t i kärnan kan forskare undersöka förändringar i kärnans storlek, form och kromatinkondensering, som är förknippade med olika cellulära processer och tillstånd.