Invitrogen™ Dynabeads™ In vitro-transkriptions- och RNA-reningskit

Funktioner av Dynabeads In vitro-transkriptions- och RNA-reningskit inkluderar:

• Flexibilitet– välj DNA-mall för IVT med flexibilitet i design och förstärkning
• Effektivitet– återanvänd DNA-mall och pärlor (minst sex gånger) för att minska kostnaden och eliminera/minimera plasmidförberedelsetid och risk för bakteriell värd-DNA-överföring
• Skalbarhet– växla mellan manuella och automatiserade arbetsflöden för att matcha önskad skala (mikrogram till gram mRNA) och genomströmning
• Kvalitet– hjälpa till att säkerställa ett säkert och flexibelt utbud av magnetiska pärlor för att navigera från RNA-baserad forskning om läkemedelsupptäckt till kommersiell tillverkning med motsvarighetslösningar (tillgängliga via OEMs kommersiella leveranser), utan att ta på sig extra tid eller kostnader från att byta teknik eller råmaterial

Översikt över arbetsflödet En
biotinylerad mall görs genom PCR-amplifiering av målsekvensen i en plasmidkonstruktion eller i en syntetisk DNA-konstruktion med användning av en biotinylerad framåtriktad primer och en icke-biotinylerad omvänd primer (figur nedan). Som ett alternativ till PCR-amplifiering kan en linjäriserad plasmid biotinyleras genom en utfyllnadsreaktion av biotin-dUTP i 5'-överhängssekvensen, förutsatt att plasmiddesignen är korrekt. Den biotinylerade mallen immobiliseras sedan direkt till den inkluderade Dynabeads Streptavidin för in vitro transkriptionspärlor utan behov av föregående rening. Den pärlbundna mallen används direkt i IVT 30 avlägsnades sedan från det syntetiserade mRNA:t genom magnetisk separation. Mallen kan återanvändas (minst sex gånger) i följd IVT reaktioner (figur nedan).

Fast fas IVT är kompatibel med vanliga reagenser som MEGAscript T7 Transcription Kit, mMESSAGE mMACHINE T7 Transcription Kit och mMESSAGE mMACHINE T7 ULTRA Transcription Kit, baserat på dina behov och strategier för kapning och polyadenylering.

Rå-RNA från IVT steg blandas med det medföljande Dynabeads Karboxylsyra för RNA-rening och medföljande Dynabeads RNA-bindande buffert tillsätts. RNA:t binder till pärlytan och de återstående komponenterna i reaktionsblandningen avlägsnas genom att applicera en magnet (se thermofisher.com/magnets ) och kassera supernatanten (figur nedan).

Automatiseringsklara för användning med KingFishers reningssystem Den 1-
μ m magnetiska pärlor är idealiska för screening med hög genomströmning. Processen kan automatiseras med hjälp av vätskehanterare eller något av våra KingFisher provreningssystem . Automatisering med ett KingFisher-instrument möjliggör IVT mall immobilisering, IVT reaktion och rening av 96 prover på mindre än fyra timmar, och upp till 5 mg mRNA-utbyte per brunn. Skripten för KingFisher Flex och KingFisher Apex automatiserade reningsarbetsflöden finns tillgängliga från vår webbplats.

Kommersiell leverans Om du vill
veta mer om motsvarighetsprodukter och supportdokumentation för GMP-kompatibel tillverkning av mRNA-vacciner och läkemedel, besök: thermofisher.com/dynabeadsmrna .