Invitrogen™ EasySelect™Pichia Expression Kit

EasySelect™Pichia Expression Kit innehåller alla nödvändiga komponenter för proteinproduktion i jästen Pichia pastoris. EasySelect™ Kit innehåller Pichia-jäststammar, expressionsvektorer och reagens som möjliggör transformation av Pichia-celler. Selektion med Zeocin™-antibiotika gör det enkelt att screena för transformerade varianter med högt antal kopior.

Fördelar med uttryckssystemet Pichia pastoris:

• Odla Pichia-celler lika lätt somE. coli
• Erhåll högre celldensitet än andra mikrobiella uttryckssystem.
• Generera mer protein per cell än andra mikrobiella uttryckssystem.
• Dra nytta av eukaryot proteinbearbetning, proteinveckning och posttranslationella modifieringar.
• Skala lätt upp från skakkolvar upp till jäsning i industriell skala.

Ett beprövat proteinuttryckssystem
Under de senaste 30 åren har Pichia pastoris använts av labb och industri runt om i världen för att producera hundratals olika proteiner från många arter inklusive människor (Ref 1, 2, 3). Pichia pastoris kan odlas lika lätt som bakterier (E. coli) eller jäst (Saccharomyces cerevisiae) men erbjuder många fördelar jämfört med dessa system (Ref 4). Pichia pastoris kan växa till mycket högre celldensitet än bakterier eller annan jäst. Pichia pastoris är kapabel att växa på metanol som en enda kolkälla, vilket gör uppskalning till industriella nivåer relativt billig.

Kraften i AOX1 Promoter
EasySelect™Pichia Expression Kit använder promotorn från Pichia alkoholoxidas 1 (AOX1)-genen för att driva produktionen av ditt protein. Pichia pastoris kan växa på metanol som sin enda kolkälla. När det odlas på metanol som enda kolkälla, representerar AOX1-mRNA upp till 5 % av totalt mRNA och AOX1-enzym kan vara upp till 30 % av cellvikten (Ref 5).

EasySelect™Pichia Expression-systemet levereras med pPICZ och pPICZ-α vektorer. pPICZ och pPICZ-αvektorer innehåller ett multipelt kloningsställe (MCS) och tillåter infogning av din gen av intresse under kontroll av AOX1-promotorn. pPICZ och pPICZ-αvektorer innehåller också en c-Myc-tagg för enkel upptäckt och en polyhistidin (6xHis)-tagg för enkel upptäckt och rening av ditt protein.

Eftersom Pichia pastoris naturligt utsöndrar få proteiner kan du använda den extracellulära signalsekvensen i pPICZα-vektorer för att tvinga utsöndring av ditt protein i odlingsmediet för att förenkla rening nedströms.

Få High-Copy Number Integration med Zeocin™ Antibiotikum
EasySelect™Pichia Expression Kit använder Zeocin™-antibiotikum för att selektera för transformerade Pichia-celler. pPICZ och pPICZ-α vektorer innehåller bleomycingenen från Streptoalloteichus hindustanus (Sh ble) som ger resistens mot Zeocin™-antibiotikum. pPICZ och pPICZ-αvektorer kan stabilt integreras i Pichia-genomet. Genom att öka koncentrationen av Zeocin™-antibiotikum, kan du enkelt välja kloner med det högsta antalet integranter och högsta proteinuttrycksnivåer.

EasySelect™Pichia Expression Kit innehåller följande komponenter:

• Stab vials med Pichia pastoris och E. colistammar för att starta dina odlingar.
• Lösningar för att göra transformationskompetenta Pichia-celler.
• pPICZ och pPICZ-αvektorer för att fusionera din gen till AOX1-promotom.
• Sekvenseringsprimrar för att bekräfta infogning av din gen i pPICZ-vektorerna.
• Zeocin™-antibiotikum för att selektera transformerade Pichia-celler.

Referenser
1. Cereghino JL, Cregg JM. Heterologous protein expression in the methylotrophic yeast Pichia pastoris. FEMS Microbiol Rev. 2000 Jan;24(1):45-66. [PubMed]

2. Cereghino GP, Cereghino JL, Ilgen C, Cregg JM. Production of recombinant proteins in fermenter cultures of the yeast Pichia pastoris. Curr Opin Biotechnol. 2002 aug;13(4):329-32. [PubMed]

3. Cregg JM. Introduction: distinctions between Pichia pastoris and other expression systems. Methods Mol Biol. 2007;389:1-10. [PubMed]

4. Cregg JM, Tolstorukov I, Kusari A, Sunga J, Madden K, Chappell T. Expression in the yeast Pichia pastoris. Methods Enzymol. 2009;463:169-89. [PubMed]

5. Cregg JM, Madden KR, Barringer KJ, Thill GP, Stillman CA. Functional characterization of the two alcohol oxidase genes from the yeast Pichia pastoris. Mol Cell Biol. 1989 Mar;9(3):1316-23. [PubMed]