Thermo Scientific™ Eco31I (BsaI) (10 U/μ L)

5'...GGTCTC (N) ₁ ▵...3'

3'...CCAGAG (N) ₅ ▵...5'

Villkor för 100 % aktivitet:

• 1X buffert G: 10 mM Tris-HCl (pH 7,5 vid 37 °C), 10 mM _MgCl2 , 50 mM NaCl och 0,1 mg/ml BSA
• Inkubera vid 37 °C

Förvaringsbuffert:

• Eco31I levereras i: 10 mM Tris-HCl (pH 7,5 vid 25 °C), 200 mM KCl, 1 mM DTT, 0,1 mM EDTA, 0,2 mg/ml BSA och 50 % (v/v) glycerol

Ligering och återklyvning:

• Efter 50-faldig översmältning med Eco31I kan mer än 95 % av DNA-fragmenten ligeras och skäras igen

Metyleringseffekter:

• Dam: aldrig överlappar-ingen effekt
• Dcm: kan överlappa-klyvning försämrad
• CpG: kan överlappa-klyvning försämrad
• EcoKI: överlappar aldrig - ingen effekt
• EcoBI: kan överlappande effekt ej fastställd

Digestion av agaros-inbäddat DNA:

• Minst 5 U av enzymet krävs för fullständig nedbrytning av μ1 g agarosinbäddat lambda-DNA på 16 timmar

Anmärkning:

Analys med lambda-DNA ( dcm- ) (#SD0021), som ett av de två Eco31I-igenkänningsställena i lambda-DNA är svårt att klyva. Eco31I-klyvningen försämras av överlappande dcm- metylering. För att undvika dcm- metylering, använd en dam , dcm- stam som GM2163 (#M0099). Lågt salt, högt glycerol (> 5 %) koncentrationer, pH> 8,0 eller ett stort överskott av enzym kan resultera i stjärnaktivitet. Eco31I klyver nedströms om dess igenkänningsställe och kan generera alla önskade 4 bas 5'-överhäng. Denna funktion är användbar för direkt kloning av PCR-produkter.