Thermo Scientific™ GsuI (BpmI) (5 U/μ L)

5'...CTGGAG (N) ₁₆ ▵...3'

3'...GACCTC (N) ₁₄ ▵...5'

Villkor för 100 % aktivitet:

• 1X buffert B: 10 mM Tris-HCl (pH 7,5 vid 37 °C), 10 mM _MgCl2 och 0,1 mg/ml BSA
• Inkubera vid 30 °C

Förvaringsbuffert:

• GsuI levereras i: 10 mM kaliumfosfat (pH 7,5 vid 25 C), °1 mM EDTA, 1 mM DTT, 0,2 mg/ml BSA och 50 % (v/v) glycerol

Metyleringseffekter:

• Dam: överlappar aldrig— ingen effekt
• Dcm: kan överlappa varandra— blockerad
• CpG: överlappar aldrig— ingen effekt
• EcoKI: överlappar aldrig— ingen effekt
• EcoBI: överlappar aldrig— ingen effekt

Anmärkning:

• Inkubation vid 37 °C resulterar i 70 % aktivitet
• GsuI kräver endast Mg ² + för sin aktivitet, men stimuleras av S-adenosylmetionin
• 0,01 mM S-adenosylmetionin ger en 2-faldig ökning av aktiviteten
• GsuI kan förbli associerad med det klyvda DNA:t
• Detta kan orsaka förskjutning av DNA-band under elektrofores
• För att undvika atypiska DNA-bandmönster, använd 6X DNA Loading Dye och SDS Solution för provberedning eller värm det digererade DNA:t i närvaro av SDS före elektrofores
• GsuI blockeras av överlappande dcm -metylering
• För att undvika dcm- metylering, använd en dam , dcm- stam som GM2163 (#M0099)