Thermo Scientific™ PagI (BspHI) (10 U/μ L)

5'...T▵CATG A...3'

3'...AGTAC▵T...5'

Villkor för 100 % aktivitet:

• 1X buffert O: 50 mM Tris-HCl (pH 7,5 vid 37 °C), 10 mM _MgCl2 , 100 mM NaCl och 0,1 mg/ml BSA
• Inkubera vid 37 °C

Förvaringsbuffert:

• PagI tillhandahålls i: 10 mM Tris-HCl (pH 7,4 vid 25 °C), 100 mM NaCl, 1 mM DTT, 1 mM EDTA, 0,2 mg/ml BSA och 50 % (v/v) glycerol

Ligering och återklyvning:

• Efter 50-faldig översmältning med PagI kan mer än 95 % av DNA-fragmenten ligeras och skäras igen

Metyleringseffekter:

• Dam: kan överlappa varandra— klyvningsförsämrad
• Dcm: överlappar aldrig— ingen effekt
• CpG: överlappar aldrig— ingen effekt
• EcoKI: överlappar aldrig— ingen effekt
• EcoBI: kan överlappa varandra— klyvningsförsämrad

Digestion av agaros-inbäddat DNA:

• Minst 5 enheter av enzymet krävs för fullständig nedbrytning av μ1 g agarosinbäddat lambda-DNA på 16 timmar

Kompatibla ändar:

• AflIII, PscI, Dsal, Eco130I, Ncol

Anmärkning:

Lågt salt, högt glycerol (> 5 %) koncentrationer, pH> 8,0 eller ett stort överskott av enzym kan resultera i stjärnaktivitet. PagI-klyvning försämras av överlappande dammetylering . För att undvika dammetylering , använd en dam-, dcm- stam som GM2163 (#M0099).