Thermo Scientific™ PstI (10 U/μ L)

5'..CTGCA▵G...3'

3'..G▵ACGT C...5'

Villkor för 100 % aktivitet

• 1X buffert O: 50 mM Tris-HCl (pH 7,5 vid 37 °C), 10 mM _MgCl2 , 100 mM NaCl och 0,1 mg/ml BSA
• Inkubera vid 37 °C

Förvaringsbuffert

• PstI tillhandahålls i: 10 mM Tris-HCl (pH 7,4 vid 25 °C), 200 mM NaCl, 1 mM DTT, 0,1 mM EDTA, 0,15 % Triton X-100 0,2 mg/ml BSA och 50 % (volym/volym) glycerol

Ligering och återklyvning

• Efter 50-faldig översmältning med PstI kan mer än 95 % av DNA-fragmenten ligeras och skäras igen

Metyleringseffekter

• Dam: överlappar aldrig— ingen effekt
• Dcm: överlappar aldrig— ingen effekt
• CpG: överlappar aldrig— ingen effekt
• EcoKI: överlappar aldrig— ingen effekt
• EcoBI: överlappar aldrig— ingen effekt

Digestion av agaros-inbäddat DNA

• Minst 5 enheter av enzymet krävs för fullständig nedbrytning av μ1 g agarosinbäddat lambda-DNA på 16 timmar

Kompatibla ändar

• Alw21I, ApaI, BseSI, Eco24I, Mph1103I, PstI, SacI, SdaI

Anmärkning:

Tillstånd med högt pH, lågt salt, högt glycerol, 8 % DMSO kan orsaka stjärnaktivitet (Malyguine, E., et al., Gene, 8, 163-177, 1980). Omgivande sekvenser: närvaron av intilliggande körningar av GC-baspar ger betydande motstånd mot klyvning (Armstrong, K. och Bauer, WR, NAR, 10, 993-1007, 1982). 100 % dUTP-inkorporering vid igenkänningsstället reducerar PstI-klyvning till 25 % (Glenn, TC, et al., Biotechniques, 17, 1086-1090, 1994). PstI kommer inte att skära AGCTGCAG när den metyleras med AluI-metyltransferas.