Thermo Scientific™ RNase H (5 U/μ L)

• Hydrolyserar inte fosfodiesterbindningarna inom enkelsträngat och dubbelsträngat DNA och RNA

• Frånvaron av endo-, exodeoxiribonukleaser och ribonukleaser bekräftad av lämpliga kvalitetstester

Källa:

• E.coli MRE-600-celler

Molekylvikt:

• 18,4 kDa monomer

Definition av aktivitetsenhet:

• En enhet av enzymet katalyserar bildningen av 1nmol syralösliga produkter på 20 minuter. vid 37 °C
• Enzymaktivitet analyseras i följande blandning: 20 mM Tris-HCl (pH 7,8), 40 mM KCl, ₈ mM MgCl2, 1 mM DTT, 24 M [ μ^3H ]-poly(A)· poly(dT), 0,03 mg/ml BSA, 4 % (volym/volym) glycerol

• Enzymet tillhandahålls i: 25 mM HEPES-KOH (pH 8,0), 50 mM KCl, 0,1 mM EDTA, 1 mM DTT, 0,1 mg/ml BSA och 50 % (v/v) glycerol

10X reaktionsbuffert:

• 200 mM Tris-HCl (pH 7,8), 400 mM KCl, 80 mM _MgCl2 , 10 mM DTT

Hämning och inaktivering:

• Inhibitorer: metallkelatorer, SH-blockerande reagenser
• Inaktiveras genom uppvärmning till 65 °C i 10 min.

Rekommenderas för:

• Avlägsnande av mRNA före syntes av andra strängens cDNA (1)
• RT-PCR och qRT-PCR: avlägsnande av RNA efter första sträng-cDNA-syntes
• Avlägsnande av poly(A)-sekvenserna av mRNA efter hybridisering med oligo(dT) (2)
• Platsspecifik klyvning av RNA (3)
• Studier av in vitro polyadenyleringsreaktionsprodukter