Läs mer
Thermo Scientific™ T4 Polynukleotidkinas (10 U/μ L)
Handla allt Thermo Scientific ProdukterBeskrivning
T4 Polynukleotidkinas (T4 PNK) katalyserar överföringen av gamma-fosfat från ATP till 5'-OH-gruppen av enkel- och dubbelsträngade DNA och RNA, oligonukleotider eller nukleosid 3'-monofosfater (framåtreaktion). Reaktionen är reversibel. I närvaro av ADP T4 Polynukleotidkinas uppvisar 5'-fosfatasaktivitet och katalyserar utbytet av fosfatgrupper mellan 5'-P-oligopolynukleotider och ATP (utbytesreaktion).
Enzymet är också ett 3'-fosfatas.
- Aktiv i restriktionsenzym, RT och T4 DNA-ligasbuffertar.
- Källa: E. coli -celler med en klonad pseT-gen av bakteriofag T4
- Molekylvikt: Enzymet är en homotetramer. Den består av fyra identiska subenheter på 28,9 kDa
- Frånvaron av endo-, exodeoxiribonukleaser och ribonukleaser bekräftas av lämpliga kvalitetstester. Funktionstestad för märkning av 5ft.-terminaler av DNA
- E.coli -celler med en klonad pseT -gen av bakteriofag T4
- Enzymet är en homotetramer. Den består av fyra identiska underenheter på 28,9 kDa
- En enhet av enzymet överför 1nmol gamma-fosfat från ATP till 5 ft.-OH DNA på 30 min. vid 37 °C
- Enzymaktivitet analyseras i följande blandning: 100 mM Tris-HCl (pH 8,0), 10 mM MgCl2, 5 mM DTT, 0,5 mM 5ft-OH DNA, 0,05 mM ATP och 0,1 MBq/ml [gamma- 33P ]-ATP
- Enzymet tillhandahålls i: 20 mM Tris-HCl (pH 7,5), 25 mM KCl, 0,1 mM EDTA, 2 mM DTT och 50 % (v/v) glycerol
- 10X reaktionsbuffert A (för framåtreaktion): 500 mM Tris-HCl (pH 7,6 vid 25 °C), 100 mM MgCl2 , 50 mM DTT, 1 mM spermidin
- 10X reaktionsbuffert B (för utbytesreaktion): 500 mM imidazol-HCl (pH 6,4 vid 25 °C), 180 mM MgCl2 , 50 mM DTT, 1 mM spermidin och 1 mM ADP
- 24 % PEG-lösning: 24 % (vikt/volym) polyetylenglykol 6000 Hämning och inaktivering:
- Inhibitorer: metallkelatorer, fosfat- och ammoniumjoner, KCl och NaCl i en koncentration högre än 50 mM
- Inaktiveras genom uppvärmning vid 75 °C i 10 min. eller genom tillägg av EDTA
Rekommenderas för:
Märkning av 5 ft.-termini av nukleinsyror (3, 4) som ska användas som prober för hybridisering, prober för transkriptkartläggning, markörer för gelelektrofores, primers för DNA-sekvensering, primers för PCR; 5 ft.-fosforylering av oligonukleotid, PCR-produkter, annat DNA eller RNA före ligering; Fosforylering av PCR-primrar; Detektion av DNA-modifiering genom [32P]-eftermärkningsanalysen (5, 6); Avlägsnande av 3ft.-fosfatgrupper (2)
Anmärkning:
Polyetylenglykol (PEG) och spermidin förbättrar hastigheten och effektiviteten av fosforyleringsreaktionen (7). PEG används i utbytesreaktionsblandningen. Som T4 Polynukleotidkinas hämmas av ammoniumjoner, använd natriumacetat för att fälla ut DNA före fosforylering (1, 2).
Specifikationer
Specifikationer
| Koncentration | 10 U/μ L |
| Enzym | T4 Polynukleotidkinas |
| Kompatibel buffert | 10X reaktionsbuffert |
| Kvantitet | 500 U |
| Produkttyp | T4 Polynukleotidkinas |
Endast för forskning. Ej för diagnostik.
Din input är viktig för oss. Fyll i det här formuläret för att ge feedback relaterad till innehållet på denna produkt.