Thermo Scientific™ Terminalt deoxinukleotidyltransferas (20 U/μ L)

• Innehåller modifierade nukleotider (t.ex. fluorescein-, biotin-, aminoallylmärkta nukleotider) Källa: E. coli -celler som bär en klonad gen som kodar för kalvtymusterminalt deoxinukleotidyltransferas

• Frånvaron av endo-, exodeoxiribonukleaser, fosfataser och ribonukleaser bekräftad av lämpliga kvalitetstester

Källa:

• E.coli -celler som bär en klonad gen som kodar för kalvtymusterminalt deoxinukleotidyltransferas

• En enhet av enzymet katalyserar inkorporeringen av 1 nmol deoxitymidylat i en polynukleotidfraktion (adsorberad på DE-81) på 60 minuter. vid 37 °C
• Enzymaktivitet analyseras i följande blandning:
• 200 mM kaliumkakodylat (pH 7,2), 1 mM _CoCl2 , 0,01 % (v/v) Triton X-100 , 10 μM oligo(dT) ₁₀ , 1 mM dTTP och 0,4MBq/ml [ ^3H ]-dTTP
Förvaringsbuffert:
• Enzymet tillhandahålls i: 100 mM kaliumacetat (pH 6,8), 2 mM 2-merkaptoetanol, 0,01 % (v/v) Triton X-100 och 50 % (volym/volym) glycerol

5X reaktionsbuffert:

• 1 M kaliumkakodylat, 125 mM Tris, 0,05 % (volym/volym) Triton X-100 , 5 mM _CoCl2 (pH 7,2 vid 25 °C)

Hämning och inaktivering:

• Inhibitorer: metallkelatorer, ammonium, klorid, jodid, fosfatjoner
• Inaktiveras genom uppvärmning vid 70 °C i 10 min. eller genom tillägg av EDTA

Rekommenderas för:

Tillverkning av syntetiska homo- och heteropolymerer (1); Homopolymerisk svans av linjärt duplex-DNA med vilken typ av 3'-OH-terminal som helst (2, 3); Oligodeoxiribonukleotid och DNA-märkning (2, 4-8); 5'-RACE (snabb amplifiering av cDNA-ändar) (9); In situ lokalisering av apoptos (10)

Anmärkning:

På grund av närvaron av _CoCl2 kan TdT Reaktionsbufferten är inkompatibel med nedströmsapplikationer. Det är nödvändigt att avlägsna _CoCl2 från reaktionsblandningen genom spinnkolonn eller fenol/kloroformextraktion och efterföljande etanolutfällning.