Thermo Scientific™ Uracil-DNA glykosylas (1 U/μ L)

• Aktiv i Fermentas-buffertar för restriktionsenzymer och termofila polymeraser
• Källa: E. coli K12-celler
• Molekylvikt: 25,6 kDa monomer

• Frånvaron av endo-, exodeoxiribonukleaser, fosfataser och ribonukleaser bekräftad av lämpliga kvalitetstester

Källa:

• E.coli K12-celler

Molekylvikt:

• 25,6 kDa monomer

Definition av aktivitetsenhet:

• En enhet av enzymet katalyserar frisättningen av 1 nanomol uracil från uracil-innehållande DNA-mall på 60 minuter. vid 37 °C

• 30 mM Tris-HCl (pH 7,5), 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1 mM DTT, 0,05 % (v/v) Tween 20 och 50 % (v/v) glycerol

10X reaktionsbuffert:

• 200 mM Tris-HCl (pH 8,2 vid 25 °C), 10 mM EDTA, 100 mM NaCl

• Inhibitorer: Ugi-protein från Bacillus subtilis- fagen PBS2, protein p56 från Bacillus subtilis- fagen phi29 (7).
• Inaktiveras genom uppvärmning vid °95 C i 10 min. Enzymaktiviteten återställs delvis vid temperaturer lägre än 55 °C. Lägg därför PCR-produkter på is efter PCR och ladda direkt på en gel

Rekommenderas för:

Kontroll av överförd kontaminering i PCR (2); Glykosylasmedierad singelnukleotidpolymorfismdetektion (GMPD) (3); Platsstyrd mutagenes (4); Som en sond för protein-DNA-interaktionsstudier (5); SNP-genotypning; Kloning av PCR-produkter (6); Generering av enkelsträngsöverhäng av PCR-produkter och cDNA

Anmärkning:

De abasiska ställena som bildas i DNA av Uracil-DNA Glycosylas kan därefter klyvas genom värme, alkalibehandling eller endonukleaser som klyver specifikt vid abasiska ställen. UDG (UNG) är aktiv i närvaro eller frånvaro av tvåvärda katjoner.