Invitrogen™ Fluorescerande proteinmärkningssatser

• Märk fluorescerande upp till 1 mg protein per reaktion (tre reaktioner per kit)
• Märk –0,5 3 mg per reaktion med DSB-X Biotinproteinmärkningskit (fem reaktioner per kit)
• Märkta proteiner redo att användas på 90 min. (∼ 15 min. praktisk tid)
• Rena snabbt proteiner genom att snabbt ta bort obundet färgämne med förpackat Zeba Spinkolonner för borttagning av färgämnen och biotin (7K MWCO, Kat.nr A44299) för> 85 % återhämtning
• Inkluderar detaljerade instruktioner för att bestämma graden av märkning (DOL)

Varje proteinmärkningskit innehåller allt du behöver för att utföra 3-5 separata märkningsreaktioner och rena de resulterande konjugaten. Det reaktiva färgämnet har antingen en succinimidylester (SE) eller en tetrafluorfenyl (TFP) esterdel som reagerar effektivt med primära aminer av proteiner för att bilda stabila –färgämnesproteinkonjugat. Var och en av flaskorna med reaktivt färgämne som tillhandahålls i kitet räcker för att märka 1 mg av en mängd olika renade proteiner, inklusive tillväxtfaktorer, cytokiner, nanokroppar, enzymer, celladhesionsmolekyler och antikroppar.

Direkt märkning med fluoroforer gör att flera primära antikroppar av samma isotyp (härrörande från samma art) kan användas i samma experiment. Stabiliserande proteiner som BSA bör avlägsnas från provet före märkning.

De olika proteinmärkningssatserna

• Blåfluorescerande Alexa Fluor 350— excitations- och emissionsmaxima på 346/442 nm
• Grönt fluorescerande Alexa Fluor 488– excitations- och emissionsmaxima på 494/519 nm; exciteras med en 488 nm argonlaserlinje och detekteras under standard FITC/Cy2-filter
• Gul-fluorescerande Alexa Fluor 532– excitations- och emissionsmaxima på 530/554 nm; exciterad med en 532 nm Nd:YAG-laserlinje och detekterad under standard Rhodamine 6G-filter
• Orange-fluorescerande Alexa Fluor 546– excitations- och emissionsmaxima på 554/570 nm; exciteras med hjälp av en 543 nm He-Ne laserlinje och detekteras under standard TRITC/Cy3-filter
• Orange-fluorescerande Alexa Fluor 555– excitations- och emissionsmaxima på 555/565 nm; exciteras med hjälp av en 543 nm He-Ne laserlinje och detekteras under standard TRITC/Cy3-filter
• Orange-röd-fluorescerande Alexa Fluor 568– excitations- och emissionsmaxima på 577/603 nm; exciterade med en 568 nm Kr-laserlinje och detekterade under standard Rhodamine Red/Cy3.5-filter
• Röd-fluorescerande Alexa Fluor 594– excitations- och emissionsmaxima på 590/617 nm; exciterad med hjälp av en 594 nm Kr eller He-Ne laserlinje och detekteras under vanliga Texas Red-filter
• Långt-röd-fluorescerande Alexa Fluor 633– excitations- och emissionsmaxima på 632/647 nm
• Långt-röd-fluorescerande Alexa Fluor 647– excitations- och emissionsmaxima på 650/668 nm; exciteras med användning av en 633 eller 635 nm Kr eller He-Ne laserlinje och detekteras under standard APC/Cy5 filter.
• Långt-röd-fluorescerande Alexa Fluor 660– excitations- och emissionsmaxima på 663/690 nm
• Nära-IR-fluorescerande Alexa Fluor 680– excitations- och emissionsmaxima på 680/700 nm
• Grönfluorescerande Fluorescein-EX– excitations- och emissionsmaxima på 494/518 nm
• Oregon Green 488– excitations- och emissionsmaxima på 496/524 nm
• Pacific Blue–en violett ljus exciterbar färg med en excitations- och emissionsmaxima på 410/455 nm
• Texas Red-X– excitations- och emissionsmaxima på 595/615 nm
• DSB-X Biotin– Konjugat kan bindas reversibelt till biotinbindande proteiner såsom streptavidin eller avidin. Koncentrationen (mg/ml) av DSB-X Biotinmärkt antikroppspreparat kan bestämmas genom att mäta absorbansen av det dialyserade provet vid 280 nm och dividera detta värde med 1,3 eller 1,4 när det mäts i lösning i en kyvett med en 1-cm väglängd. DSB-X Biotin absorberas inte nämnvärt vid 280 nm.

För märkning av mindre mängder antikroppar (∼ 100μ g), rekommenderar vi våra antikroppsmärkningssatser. Läs bruksanvisningen för proteinmärkningssatsen för mer djupgående information, protokoll, molekylvikter och märkningsgrad för varje färgämne.