Invitrogen™ Image-iT™ Fixativa lösningar

Image-iT Fixativa lösningar är färdiga fixeringslösningar som erbjuds i olika format för att möta olika forskningsbehov. De är idealiska för användning med fluorescerande proteiner, såsom GFP och RFP, samt andra små färgämnesfluoroforer. Inget mer blandande av giftiga fixeringspulver eller utspädning av koncentrerade lösningar med icke-optimalt pH. Tillsätt bara dessa fixativa lösningar till celler/vävnad och inkubera i 10–15 minuter i rumstemperatur. De är idealiska för användning med alla antikroppsbaserade detektionsmetoder, inklusive immunocytokemi (ICC), immunfluorescens (IF) och immunohistokemi (IHC).

Funktioner hos Image-iT fixativa lösningar inkluderar:

• Klar att användas
• Högrenhet, bildgivande fixativ med minimala bakgrundssignalartefakter
• Metanolfritt
• Optimerad för sekundär antikroppsmärkning, färgning av fixcellfärg och kolorimetrisk IHC

4% formaldehyd eller paraformaldehyd fixativa lösningar

4 % formaldehyd och paraformaldehyd är de mest använda fixativa för immunocytokemi (ICC), immunofluorescens (IF) och immunohistokemi (IHC). Image-IT™ Paraformaldehyd 4 % i 0,1 m fosfatbuffert pH 7,4 (Kat. Nej. I28800), levereras i ett tio flaskor med 10 ml vardera. Image-iT™ Formaldehyd 4 % i PBS tillhandahålls i storlek 20 ml (Cat. Nej. FB002) eller 5 x 20 ml storlek (Cat. nr R37814). Paraformaldehyd/formaldehyd 4 % i 0,1 M fosfatbuffert har ∼300 mOsm mindre osmolaritet än i PBS, vilket hjälper till att upprätthålla cellmorfologin innan fixeringsmedlet får chans att fixera de inre cellulära facken. För paraformaldehyd/formaldehyd i PBS eller fosfat buffert, tillsätt fixativet i cellerna och inkubera i 5–10 minuter i rumstemperatur. Tvätta cellerna i PBS efter inkubation och gå sedan vidare till blockeringssteget.

Paraformaldehyd 3%, glutaraldehyd 0,35% fixativ lösning

3 % paraformaldehyd med 0,35 % glutaraldehyd är en färdig lösning som tillhandahålls i metanolfri, 0,1 M natriumkakodylat buffert. Yuan Qin et al. (1) fann att en blandning av paraformaldehyd och glutaraldehyd kan bevara mitokondriemorfologin bättre än någon av dem ensam.

Paraformaldehyd är en liten molekyl som snabbt tränger in i celler/vävnad och binder proteiner och andra molekyler på plats. Glutaraldehyd är en större molekyl med två reaktiva aldehydgrupper som ökar fixationspotentialen och hjälper till att skapa långa kedjor av glutaraldehyd, vilket skapar en matris. Denna förmåga hjälper till att bevara lokaliseringen av proteiner i komplexa miljöer såsom mitokondrier.

För att fixa celler/vävnad rekommenderas 5 –à 10 minuters inkubation i rumstemperatur. Med glutaraldehyd kan ökad autofluorescens observeras på grund av ökad närvaro av reaktiva aldehydgrupper. För att minska denna autofluorescens rekommenderas cirka sju minuters inkubation med 0,1 mil. glycin eller nyss preparerat 0,1 % (med v) natriumborhydrid efter fixering men före blockering.

Glyoxal 3% fixeringslösning

Glyoxal är en mindre molekyl än formaldehyd eller glutaraldehyd. Den tränger snabbt in i celler/vävnad, fixerar proteinerna och bevarar cellmorfologin bättre än formaldehyd (2). Glyoxal 3% fixeringslösning är en färdig fixeringslösning som tillhandahålls i två separata flaskor: komponent A (92 ml) och komponent B (8 ml), som innehåller absolut etanol, glyoxallösning, ättiksyra och vatten. Blanda lösning A och lösning B i en tom flaska, virvla ihop de två lösningarna och ge pH 4,5 med tillsats av 1M NaOH. När den blandats måste denna lösning användas omedelbart. För att fixera celler/vävnad, inkubera cell/vävnad vid rumstemperatur i cirka 10 minuter.

Referenser

1. Qin Y, Jiang W, Li A, Gao M, Liu H, Gao Y, Tian X, Gong G. Kombinationen av paraformaldehyd och glutaraldehyd är en potentiell fixering för mitokondrier. Biomolekyler. 10 maj 2021; 11(5):711.
2. Richter KN, m.fl. Glyoxal som ett alternativt fixeringsmedel till formaldehyd vid immunfärgning och superupplösningsmikroskopi. EMBO J. 2018 4 jan; 37(1):139-159.