Thermo Scientific™ Image-iT™ Fixativa lösningar

Image-iT Fixative Solutions är färdiga fixativa lösningar som tillhandahålls i olika format för att möta en mängd olika forskningsbehov. De är idealiska för användning med fluorescerande proteiner, såsom GFP och RFP, och andra små färgämnen fluoroforer. Ingen mer blandning av giftiga fixeringspulver eller utspädning av koncentrerade lösningar med icke-optimalt pH. Lägg bara till dessa fixativa lösningar till celler/vävnad och inkubera i 10-15 minuter vid rumstemperatur. De är idealiska för användning med alla antikroppsbaserade detektionsmetoder, inklusive immuncytokemi (ICC), immunfluorescens (IF) och immunhistokemi (IHC).

Funktioner av Image-iT Fixativa lösningar inkluderar:
• Färdig att använda
• Fixativ av hög renhet, avbildningsgrad med minimala bakgrundssignalartefakter
• Metanolfri
• Optimerad för sekundär antikroppsmärkning, färgning av fixerade celler och kolorimetrisk

IHC 4 % formaldehyd eller paraformaldehyd fixativlösningar
4 % formaldehyd och paraformaldehyd är de vanligaste fixativen för immuncytokemi (ICC), immunfluorescens (IF) och immunhistokemi. Image-IT™ Paraformaldehyd 4 % i 0,1 M fosfatbuffert pH 7,4 (kat. nr. I28800), tillhandahålls i tio injektionsflaskor med 10 ml vardera. Image-iT™ Formaldehyd 4 % i PBS tillhandahålls i storleken 20 ml (kat. nr. FB002) eller 5 x 20 ml storlek (kat. nr. R37814). Paraformaldehyd/formaldehyd 4 % i 0,1 M fosfatbuffert har∼ 300 mOsm mindre osmolaritet än i PBS, vilket hjälper till att upprätthålla cellulär morfologi innan fixeringsmedlet har en chans att fixera de inre cellfacken. För paraformaldehyd/formaldehyd i PBS eller fosfatbuffert, tillsätt bara fixeringsmedlet till cellerna och inkubera i 5-10 minuter vid rumstemperatur. Tvätta cellerna i PBS efter inkubation och fortsätt till blockeringssteget.

Paraformaldehyd 3 %, Glutaraldehyd 0,35 % Fixativ lösning
3 % paraformaldehyd med 0,35 % glutaraldehyd är en färdig att använda lösning som tillhandahålls i metanolfri, 0,1 M natriumkakodylatbuffert. Yuan Qin, et al. (1) fann att en blandning av paraformaldehyd och glutaraldehyd kan bevara mitokondriell morfologi bättre än var och en ensam.

Paraformaldehyd är en liten molekyl som penetrerar celler/vävnad snabbt och fixerar proteiner och andra molekyler på plats. Glutaraldehyd är en större molekyl med två reaktiva aldehydgrupper som ökar potentialen för fixering och hjälper till att skapa långa kedjor av glutaraldehyd, vilket skapar en matris. Denna förmåga hjälper till att bevara lokalisering av proteiner i komplex miljö som mitokondrier.

För att fixera celler/–vävnad rekommenderas 5 10 minuters inkubation i rumstemperatur. Med glutaraldehyd kan ökad autofluorescens observeras på grund av ökad närvaro av reaktiva aldehydgrupper. För att minska denna autofluorescens rekommenderas cirka sju minuters inkubation med 0,1 M glycin eller nyberedd 0,1 % (vikt/volym) natriumborhydrid efter fixering men före blockering.

Glyoxal 3% fixeringslösning
Glyoxal är en mindre molekyl än formaldehyd eller glutaraldehyd. Det penetrerar celler/vävnad snabbt, fixerar proteinerna och bevarar cellmorfologin bättre än formaldehyd (2). Glyoxal 3 % fixeringslösning är en färdig fixeringslösning som tillhandahålls i två separata flaskor: Komponent A (92 mL) och komponent B (8 mL), som innehåller absolut etanol, glyoxallösning, ättiksyra och vatten. Blanda lösning A och lösning B i en tom flaska, virvla ihop de två lösningarna och ställ till ett pH på 4,5 med tillsats av 1 M NaOH. Efter blandning måste denna lösning användas omedelbart. För att fixera cellerna/vävnaden, inkubera cell/vävnad vid rumstemperatur i cirka 10 minuter.

Referenser
1: Qin Y, Jiang W, Li A, Gao M, Liu H, Gao Y, Tian X, Gong G. Kombinationen av paraformaldehyd och glutaraldehyd är ett potentiellt fixativ för mitokondrier. Biomolekyler. 2021 maj 10;11(5):711.
2: Richter KN, et al. Glyoxal som ett alternativt fixeringsmedel till formaldehyd i immunfärgning och superupplösningsmikroskopi. EMBO J. 4 januari 2018;37(1):139-159.