Invitrogen™ Image-iT™ LIVE Red and Green Caspase Apoptos Detection Kit för mikroskopi

De Image-iT LIVE röda och gröna kaspasdetektionssatser för mikroskopi använder en ny metod för att detektera aktiva kaspaser: båda analyssatserna drar fördel av en fluorescerande hämmare av kaspaser (FLICA ) metodik, som är en affinitetsmärkning. Detta reagens associerar en fluormetylketondel (FMK), som kan reagera kovalent med ett cystein, med en kaspasspecifik aminosyrasekvens. Olika aminosyraigenkänningssekvenser används för att detektera olika kaspaser: valin-alanin-asparaginsyra (VAD) för polykaspaser (inklusive kaspas-1, -3, -4, -5, -6, -7, -8 och -9), och asparaginsyra-glutaminsyra-valin-asparaginsyra (DEVD) för kaspas 3/7. En sulforhodamin (SR ) grupp eller karboxifluorescein (FAM ) grupp är kopplad som reporter.

De FLICA reagens tros interagera med det enzymatiska reaktiva centret av ett aktiverat kaspas via igenkänningssekvensen och sedan fästa kovalent genom FMK-delen. De FLICA inhibitor är cellgenomsläpplig och icke-cytotoxisk. Obunden FLICA molekyler diffunderar ut ur cellen och tvättas bort; den återstående röda eller gröna fluorescerande signalen är ett direkt mått på mängden aktivt kaspas närvarande vid den tidpunkt då hämmaren tillsattes. De ungefärliga excitations- och emissionstopparna för FLICA propidiumjodid och Hoechst 33342 reagenser är 488⁄ nm/530 nm, 535⁄ nm/6617 nm och 350 nm/⁄ 461 nm, respektive. Detektionsreagensen som ingår i Image-iT LIVE Red Poly Caspases, Red Caspase-3/7, Green Poly Caspases och Green Caspase-3/7 Detektionskit är SR-VAD-FMK, SR-DEVD-FMK, FAM-VAD-FMK respektive FAM-DEVD-FMK.