Invitrogen™ En Shot™ BL21-AI™ Kemiskt kompetent E. coli

Ett skott BL21-AI Kemiskt kompetenta E. coli - celler är designade för tillämpningar som kräver tät reglering och starkt uttryck av toxiska proteiner från alla T7-promotorbaserade expressionssystem. Ett derivat av E. coli B-stammen, BL21-AI innehåller inte lonproteaset och har medvetet brist på det yttre membranproteaset OmpT.

Avsaknaden av två nyckelproteaser minskar nedbrytningen av heterologa proteiner uttryckta i stammen. Dessutom gör flera andra stamegenskaper dessa celler särskilt väl lämpade för proteinproduktion, nämligen snabb tillväxt i minimalt medium, en lägre acetatproduktion när de odlas i högt glukosmedium och förmågan att nå hög celldensitet.

BL21-AI E. coli innehåller en kromosominsättning av en kassett innehållande T7 RNA-polymeraset (T7RNAP) i ara B-lokuset för ara BAD-operonet, vilket placerar regleringen av T7 RNAP under kontroll av den arabinos-inducerbara ara BAD-promotorn. ara B-genen deleteras i denna stam. Närvaron av tet A-genen ger resistens mot tetracyklin och tillåter verifiering av stamidentitet med användning av tetracyklin. Utbytet av rekombinant protein erhållet från BL21-AI är generellt lik den som erhålls från BL21 (DE3). BL21-AI, på ’grund av dess egenskaper och genomiska bakgrund, användes för att belysa grundläggande steg i anpassningsprocessen av CRISPR/Cas-systemet. Ett skott BL21-AI Kemiskt kompetenta celler har en transformationseffektivitet på> 1 x 10 ⁸ cfu/μ g plasmid-DNA.

Ett skott BL21-AI Kemiskt kompetent E. coli -erbjudande:
• Omvandlingseffektivitet av> 1 x 10 ⁸ cfu/μ g kontrollplasmid-DNA
• Jon- och OmpT-proteasbrist som minskar nedbrytningen av rekombinant protein
• T7 RNA-polymeras kontrolleras av den hårt reglerade arabinos-inducerbara ara BAD-promotorn
•hsd S-mutation som möjliggör effektiv transformation av ometylerat DNA
• Idealisk för att inducera uttryck av toxiskt protein från vilken T7-promotorbaserad plasmid

som helst . Enkelt att använda One Shot-format
BL21-AI Kemiskt kompetenta E. coli -celler levereras i det bekväma, enreaktionsformatet One Shot. Formatet för engångsbruk med ett rör gör att alla steg i transformationsprotokollet, upp till plätering, kan ske i samma rör, vilket hjälper till att spara tid och förhindra kontaminering.

Genotyp
F^– omp T hsd S _B (r _B ^–, m _B ^–) gal dcm ara B::T7RNAP- tet A

Hitta den stam och format som passar dina behov
Vi erbjuder flera E. coli- stammar för proteinuttryck.
BL21 Star (DE3) och andra stammar finns i MultiShot format för applikationer med hög genomströmning.
Vi erbjuder en mängd olika system för uttryck av rekombinanta proteiner i E. coli. Champion pET-expressionssystemet ger den högsta nivån av proteinproduktion som finns tillgänglig i alla expressionssystem.

Anteckningar
• För att inducera uttryck från ara BAD-promotorn, använd L-arabinos. För att undertrycka basalt uttryck från ara BAD-promotorn, använd glukos. Även om glukos saknas är basaluttrycket i allmänhet lågt.
• BL21-AI stamgenomsekvenser tillgängliga i NCBI GenBank databas under accessionsnummer CP047231 (Bhawsinghka et al. 2020).