Invitrogen™ BLOCK-iT™ Lentiviralt Pol II miR RNAi uttryckssystem med EmGFP

Bredar de potentiella RNAi-applikationerna utöver de för andra traditionella retrovirala system (Naldini, 1998). De BLOCK-iT Lentiviral Pol II miR RNAi Expression System med EmGFP inkluderar:
o A BLOCK-iT Pol II miR RNAi Expression Vector Kit för produktion av en expressionsklon innehållande en dubbelsträngad oligonukleotid som kodar för en pre-miRNA-sekvens för expression i däggdjursceller. De BLOCK-iT Pol II miR RNAi Expression Vector (pcDNA ™6.2-GW/EmGFP-miR) ger ett snabbt och effektivt sätt att klona ds oligo-duplex som kodar för en önskad miRNA-målsekvens i en vektor som innehåller en Pol II-promotor (CMV) för användning i RNAi-analys. De BLOCK-iT Pol II miR RNAi Expression Vector är specifikt utformad för att tillåta uttryck av miRNA-sekvenser och innehåller specifika miR-flankerande sekvenser som tillåter korrekt bearbetning av miRNA.
o Samcistroniskt uttryck av en Emerald GFP (EmGFP) reporter i pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR-vektorn, vilket resulterar i mycket stark korrelation av EmGFP-uttryck med knockdown-aktiviteten hos ditt miRNA
o ™pDONR 221-vektorn för att överföra premiRNA-expressionskassetten till den lentivirala expressionsplasmiden med Gateway™ Teknologi. Gateway Technology är en universell kloningsmetod som drar fördel av de platsspecifika rekombinationsegenskaperna hos bakteriofag lambda (Landy, 1989) för att tillhandahålla ett snabbt och mycket effektivt sätt att flytta din DNA-sekvens av intresse till flera vektorsystem.
o A pLenti6/V5-DEST destinationsvektor till vilken pre-miRNA-kassetten från expressionsklonen överförs med hjälp av Gateway Technology. Denna expressionsplasmid innehåller element som tillåter packning av konstruktionen i virioner och Blasticidinresistensmarkören för val av stabilt transducerade cellinjer.
o Gateway BP och LR Clonase™ II-enzymblandningar som underlättar överföringen av pre-miRNA-expressionskassetten från expressionsvektorn till pLenti6/V5-DEST destination vektor.
o Komponenter i ViraPower Lentiviralt system för produktion av ett replikationsinkompetent lentivirus som stabilt uttrycker miRNA av intresse i både delande och icke-delande däggdjursceller. De ViraPower Lentiviral Technology underlättar mycket effektiv, in vitro eller in vivo leverans av en målgen eller RNA till delande och icke-delande däggdjursceller med hjälp av ett replikationsinkompetent lentivirus. Baserat på lentikat™ system utvecklat av Cell Genesys (Dull et al., 1998). ViraPower Lentiviral Technology har funktioner som förbättrar dess biosäkerhet samtidigt som den tillåter högnivåexpression i ett bredare spektrum av celltyper än traditionella retrovirala system.

Kloning, Gateway-kloning, Lentiviral shRNA och miRNA, RNAi, RNAi, epigenetik och icke-kodande RNA-forskning, virusbaserad RNAi