Läs mer
Invitrogen™ BLOCK-iT™ Lentiviralt Pol II miR RNAi uttryckssystem
Beskrivning
Bredar de potentiella RNAi-applikationerna utöver de för andra traditionella retrovirala system (Naldini, 1998). De BLOCK-iT Lentiviral Pol II miR RNAi Expression System inkluderar:
o A BLOCK-iT Pol II miR RNAi Expression Vector Kit för produktion av en expressionsklon innehållande en dubbelsträngad oligonukleotid som kodar för en pre-miRNA-sekvens för expression i däggdjursceller. De BLOCK-iT Pol II miR RNAi Expression Vector (pcDNA ™6.2-GW/miR) ger ett snabbt och effektivt sätt att klona ds oligo-duplex som kodar för en önskad miRNA-målsekvens i en vektor som innehåller en Pol II-promotor (CMV) för användning i RNAi-analys. De BLOCK-iT Pol II miR RNAi Expression Vector är specifikt utformad för att tillåta uttryck av miRNA-sekvenser och innehåller specifika miR-flankerande sekvenser som tillåter korrekt bearbetning av miRNA.
™o pDONR 221-vektorn för att överföra premiRNA-expressionskassetten till den lentivirala expressionsplasmiden med Gateway™ Teknologi. Gateway Technology är en universell kloningsmetod som drar fördel av de platsspecifika rekombinationsegenskaperna hos bakteriofag lambda (Landy, 1989) för att tillhandahålla ett snabbt och mycket effektivt sätt att flytta din DNA-sekvens av intresse till flera vektorsystem.
o A pLenti6/V5-DEST destinationsvektor till vilken pre-miRNA-kassetten från expressionsklonen överförs med hjälp av Gateway Technology. Denna expressionsplasmid innehåller element som tillåter packning av konstruktionen i virioner och Blasticidinresistensmarkören för val av stabilt transducerade cellinjer.
o Gateway BP och LR Clonase™ II-enzymblandningar som underlättar överföringen av pre-miRNA-expressionskassetten från expressionsvektorn till
pLenti6/V5-DEST destination vektor.
o Komponenter i ViraPower Lentiviralt system för produktion av ett replikationsinkompetent lentivirus som stabilt uttrycker miRNA av intresse i både delande och icke-delande däggdjursceller. De ViraPower Lentiviral Technology underlättar mycket effektiv, in vitro eller in vivo leverans av en målgen eller RNA till delande och icke-delande däggdjursceller med hjälp av ett replikationsinkompetent lentivirus. Baserat på lentikat™ system utvecklat av Cell Genesys (Dull et al., 1998). ViraPower Lentiviral Technology har funktioner som förbättrar dess biosäkerhet samtidigt som den tillåter högnivåexpression i ett bredare spektrum av celltyper än traditionella retrovirala system.
Kloning, Gateway-kloning, Lentiviral shRNA och miRNA, RNAi, RNAi, epigenetik och icke-kodande RNA-forskning, virusbaserad RNAi
Specifikationer
Specifikationer
| Produkttyp | RNAi Expression Vector Kit |
| Innehåll och lagring | De BLOCK-iT™ Lentiviral Pol II miR RNAi Expression System innehåller BLOCK-iT™ Pol II miR RNAi Expression Vector Kit som innehåller två lådor. Kloningsboxen innehåller linjäriserad pcDNA ™6,2-GW/miR, 10X hybridiseringsbuffert, T4 DNA-ligas, 5X DNA-ligeringsbuffert, lacZ-kontrolloligo, lacZ-kontrollplasmid, negativ kontrollplasmid, DNas/RNasfritt vatten och framåt- och bakåtsekvenseringsprimrar. Förvara vektorerna, buffertarna, kontrolloligo och plasmider, vatten och sekvenseringsprimrar vid -20 °C. Den ena Shot™ lådan innehåller transformationsreagens inklusive tjugoen 50-μ l alikvoter av One Shot™ TOP10 Kemiskt kompetent E. coli, SOC-medium och en pUC19 supercoiled kontrollplasmid. Förvara dessa transformationsreagenser -80 °C. Alla reagenser är garanterade stabila i 6 månader när de förvaras på rätt sätt. De BLOCK-iT™ Lentiviral Pol II miR RNAi Expression System innehåller också alla nödvändiga reagenser för Gateway™ kloning in i det lentivirala uttryckssystemet, inklusive: pLenti6/V5-DEST Vektor, pLenti6-V5/GW-lacZ-kontroll, ™pDONR 221, ViraPower™ Lentiviral Bsd Support Kit (ViraPower™ Förpackningsblandning, Lipofectamine™ 2000 transfektionsreagens och Blasticidin), 293FT Cell Line, One Shot™ Stbl3™ Kemiskt kompetent E. coli, One Shot™ TOP10 Kemiskt kompetent E. coli, och Gateway™ LR och BP Clonase™ II Enzymblandningar. Förvara Lipofectamine™ 2000 reagens vid +4 °C (får inte frysas). Lagra vektorerna, ViraPower™ Packaging Mix, Blasticidin och båda Clonase™ II Enzymblandningar vid -20 °C. Förvara de kompetenta cellerna vid -80 °C. Förvara 293FT Cell Line i flytande kväve. Alla reagenser är garanterade stabila i 6 månader när de förvaras på rätt sätt. |
| Kloningsmetod | Gateway™ |
| Konstitutivt eller inducerbart system | Konstitutiv |
| Leveranstyp | Lentiviral |
| RNAi typ | miRNA [mikroRNA] |
| Urvalsagent (eukaryot) | Blasticidin |
| Vektor | pLenti |
| Promotor | CMV |
| Produktlinje | BLOCK-iT , Gateway |
| Visa mer |
Endast för forskning. Ej för diagnostik.
Genom att klicka på Skicka bekräftar du att du kan bli kontaktad av Fisher Scientific angående feedbacken du har lämnat i detta formulär. Vi kommer inte att dela din information för andra ändamål. All kontaktinformation som tillhandahålls ska också underhållas i enlighet med vår Sekretesspolicy.