Invitrogen™ ElectroMAX™ Stbl4™ Kompetenta celler

ElectroMAX Stbl4 Kompetenta celler är speciellt designade för kloning av instabila inlägg. Denna stam är ett derivat av Stbl2 celler (konstruerade från JM109/J5-stam). För att förbättra prestandan introducerades galmutationen , återställdes till vildtyp lon+ allel och F′ episom introducerad. De Stbl4 stam behåller de genetiska egenskaperna hos Stbl2 stam för upprätthållande av instabila insättningar såsom retrovirala sekvenser, direkta upprepningar och tandem-arraygener. Dessutom Stbl4 stam används enligt uppgift för upptäckt av komplexa sekundära metaboliter och konstruktion och underhåll av CRISPR-bibliotek.

Som elektrokompetenta celler, Stbl4 celler kan uppnå hög transformationseffektivitet av> 5 x 10 ⁹ cfu/μ g, vilket gör dem idealiska för utmanande applikationer som att generera cDNA, CRISPR och genomiska bibliotek av instabila insert eller använda låg DNA-inmatning. Elektrokompetent Stbl4 celler kan ta upp och bibehålla stora plasmider (t.ex. 50 kb kosmider och –100 200 kb Pl-kloner). Stbl4 celler innehåller också en F'-episom, vilket gör att de kan tjäna som en värd för enkelsträngat DNA såsom M13mp-kloningsvektorer om en gräsmatta med DH5 αF ′IQ tillhandahålls för att tillåta plackbildning. lac Z ΔM15 markören gerα -komplettering avβ -galaktosidasgenen från pUC eller liknande vektorer och kan därför användas för blåvit screening av kolonier på agarplattor innehållande X-gal eller Bluo-gal och IPTG. mcr A-mutationen och mcr BC- hsd RMS- mrr- deletionen tillåter kloning av genomiska sekvenser som är metylerade. Slutligen ökar slut -A1-mutationen avsevärt plasmidutbytet och kvaliteten.

ElectroMAX Stbl4 kompetenta cellfunktioner
• Ge omvandlingseffektiviteter av> 5 x 10 ⁹ cfu/μ g
• Unik genotyp stabiliserar direkta upprepningar och retrovirala sekvenser
•mcr A-mutationen och mcr BC- hsd RMS- mrr- deletionen tillåter kloning av metylerade genomiska sekvenser
• Stöd för blåvit screening av rekombinanta kloner på grund av lac ΔZ
• M15 Designad för att leverera högutbytesplasmidpreparat för nedströmsapplikationer
• Stabil F'-episom tillåter isolering av ssDNA.

Förökning av instabilt och stort DNA med celler med hög transformationseffektivitet
Många kompetenta cellstammar har genotypen rec A1, vilket minskar rekombination. Det finns dock vissa fall då DNA:t som du försöker klona fortfarande är instabilt i sådana celler, kanske på grund av närvaron av inverterade eller direkta upprepningar eller GC-rika områden. Även om sådana sekvenser är relativt vanliga i eukaryota genom, är de sällsynta i E. coli . Följaktligen kan omarrangemang inträffa när dessa sekvenser introduceras i standard E. coli- stammar.

Genotyp:mcr AΔ ( mcr BC- hsd RMS- mrr ) rec A1 end A1 gyr A96 gal–thi -1 sup E44λ–rel A1Δ ( lac - proAB ) / F′ [ pro AB+ lac IqZ MΔ15 Tn 10(TetR)]

Hitta den belastning och det format som passar dina behov
• Stbl-stammar finns tillgängliga med en mängd olika genetiska bakgrunder.
• De Stbl3 stam finns i MultiShot format för applikationer med hög genomströmning.
• MAX Efficiency DH5 αF ´IQ Competent Cells (kat. nr. 18288019) finns tillgängliga i kemiskt kompetent format.

Anteckningar
• För att maximera stabiliseringen av direkta upprepningar och retrovirala sekvenser, inkubera Stbl4 celler och utför expressionsstudier vid 30 °C.
• En högspänningselektroporationsapparat krävs.
• Stbl4 stamgenomsekvenser är tillgängliga i NCBI GenBank databas under accessionsnummer CP076043.1 och CP076044.1 (Assad et al. 2021).