Invitrogen™ En Shot™ BL21(DE3)pLysE kemiskt kompetent E. coli

One Shot BL21(DE3)pLysE kemiskt kompetenta E. coli -celler är idealiska för användning med bakteriofag T7-promotorbaserade expressionssystem som pRSET och pET. PLysE-plasmiden som bärs av BL21(DE3)pLysE-stammen producerar högre mängder T7-lysozym än pLysS för att ytterligare reducera basalnivåexpression av genen av intresse. Liksom pLysS ger pLysE resistens mot kloramfenikol (CamR) och innehåller p15A-ursprunget för kompatibilitet med plasmider som innehåller ColE1- eller pMB1-ursprunget (dvs. pUC- eller pBR322-härledda plasmider). Rekombinanta proteiner som är icke-toxiska för E. coli uttrycks i allmänhet i högre nivåer i BL21(DE3)-celler jämfört med BL21(DE3)pLysE-stammen med strängare expressionskontroll. BL21(DE3)pLysE-stammen rekommenderas för användning vid uttryck av toxiska gener (alternativt, BL21-AI kan övervägas).

BL21 (DE3) E. coli -stammen är en av de mest populära värdstammarna för att producera rekombinanta proteiner och anpassad för forskning eller industriella tillämpningar (t.ex. det första biofarmaceutiska rekombinanta humaninsulin). Denna stam hade konstruerats för att bäraλ DE3-lysogen som innehåller T7 RNA-polymerasgenen under kontroll av lac UV5-promotorn. IPTG krävs för att inducera uttryck av T7 RNA-polymeraskaskadsystemet som i sin tur transkriberar den T7-promotorreglerade målgenen.

BL21(DE3) är ett derivat av E. coli B-stammen som inte innehåller lon-proteaset och som även har brist på det yttre membranproteaset OmpT. Avsaknaden av två viktiga proteaser minskar nedbrytningen av heterologa proteiner som uttrycks i stammarna. Dessutom gör flera andra stamegenskaper dem särskilt lämpade för proteinproduktion, nämligen snabb tillväxt i minimalt medium, en lägre acetatproduktion när de odlas i högt glukosmedium och förmågan att nå hög celldensitet.

One Shot BL21(DE3)pLysE kemiskt kompetent E. coli -erbjudande:
• Omvandlingseffektivitet av> 1 x 10 ⁷ cfu/μ g kontrollplasmid-DNA
• Jon- och OmpT-proteasbrist minskar nedbrytningen av rekombinant protein
• IPTG-inducerbar lac UV5-promotor kontrollerar uttrycket av T7 RNA-polymeraset
• pLysE (CamR) plasmid för reducerat basalt uttryck i oinducerade celler
•hsd S-mutation möjliggör effektiv transformation av ometylerat DNA
• Snabb tillväxt i minimalt medium och förmåga att nå hög celldensitet

BL21(DE3)pLysE E. coli är idealiska för användning med T7-promotorbaserade expressionsvektorer. Liksom BL21(DE3)pLysS E. coli , bär BL21(DE3)pLysE-celler lambda DE3-lysogenet. Dessutom innehåller BL21(DE3)pLysE-celler pLysE-plasmiden, som konstitutivt uttrycker T7-lysozym. T7-lysozym minskar det basala uttrycket av målgener genom att hämma T7-RNA-polymeras. pLysE-plasmiden i BL21(DE3)pLysE uttrycker högre nivåer av T7-lysozym än pLysS-plasmiden i BL21(DE3)pLysS. BL21(DE3)pLysE-stammen ger strängare kontroll av T7 RNA-polymeras, vilket är nödvändigt när det rekombinanta proteinet som ska uttryckas är giftigt.

Enkelt att använda One Shot-format
BL21(DE3)pLysE Kemiskt kompetenta E. coli -celler levereras i det bekväma enreaktionsformatet One Shot. Formatet för engångsbruk med ett rör gör att alla steg i transformationsprotokollet, upp till plätering, kan ske i samma rör, vilket hjälper till att spara tid och förhindra kontaminering.

Genotyp
^–F omp T hsd SB (r _B , –m _B ) –gal dcm (DE3) pLysE(CamR)

Hitta den stam och det format du behöver
• Vi erbjuder andra E. coli -stammar för proteinuttryck.
• För uttryck av giftiga proteiner, överväg BL21-AI One Shot kemiskt kompetent E. coli (kat. nr. C607003).
• BL21 Star (DE3) och andra stammar finns i MultiShot format för applikationer med hög genomströmning.
• Vi erbjuder en mängd olika system för expression av rekombinanta proteiner i E. coli , Champion pET-expressionssystemet ger den högsta nivån av proteinproduktion som finns tillgänglig i alla expressionssystem.