Invitrogen™ BL21 Star™ (DE3)pLys Ett Shot™ Kemiskt kompetent E. coli

Ett skott BL21 Star (DE3)pLysS kemiskt kompetenta E. coli är celler designade för tillämpningar som kräver högnivåexpression av icke-toxiska rekombinanta proteiner från vektorer med lågt eller högt kopietal, såsom pRSET och pET. BL21 (DE3) E. coli -stammen är en av de mest populära värdstammarna för att producera rekombinanta proteiner och är anpassad för forskning och industriella tillämpningar (t.ex. det första biofarmaceutiska rekombinanta humaninsulin).

BL21(DE3) är ett derivat av E. coli B-stammen som inte innehåller lon-proteaset och som även har brist på det yttre membranproteaset OmpT. Avsaknaden av två viktiga proteaser minskar nedbrytningen av heterologa proteiner som uttrycks i stammarna. Dessutom gjorde flera andra stamegenskaper dem särskilt lämpade för proteinproduktion, nämligen snabb tillväxt i minimalt medium, en lägre acetatproduktion när de odlades i högt glukosmedium och förmågan att nå hög celldensitet.

Denna stam konstruerades för att bäraλ DE3-lysogen som innehåller T7 RNA-polymerasgenen under kontroll av lac UV5-promotorn. IPTG krävs för att inducera uttryck av T7-RNA-polymeraskaskadsystemet som i sin tur transkriberar T7-promotorreglerad målgen. pLysS CamR-plasmiden som bärs av BL21 Star (DE3) pLysS-stam uttrycker T7-lysozym, en T7 RNA-polymerashämmare som förhindrar läckande uttryck i oinducerade celler. P15a-ursprunget för pLysS gör denna plasmid kompatibel med pUC- eller pBR322-härledda plasmider. Denna stam erbjuder förbättrad mRNA-stabilitet på grund av en mutation i RNaseE-genen ( rne 131) som minskar nivåerna av endogena RNaser och mRNA-nedbrytning, och därigenom ökar stabiliteten av mRNA-transkriptioner och ökar proteintranskriptionens stabilitet. De BL21 Star (DE3) pLys-stam har lägre basalt uttryck av heterologa gener än BL21 Star (DE3) stam. Andra tåg som t.ex BL21-AI rekommenderas för giftigt proteinuttryck. Ett skott BL21 Star (DE3) pLysS Kemiskt kompetenta celler har en transformationseffektivitet på> 1 x 10 ⁸ cfu/μ g plasmid-DNA.

Ett skott BL21 Star (DE3)pLysS kemiskt kompetent E.coli -erbjudande:
• Omvandlingseffektivitet av> 1 x 10 ⁸ cfu/μ g plasmid-DNA
• Jon- och OmpT-proteasbrist minskar nedbrytningen av rekombinant protein
• IPTG-inducerbar lacUV5-promotor kontrollerar uttrycket av T7 RNA-polymeraset
•rne 131-mutation minskar nivåerna av endogena RNaser och mRNA-nedbrytning
• pLysS (CamR)-plasmid för reducerat basalt uttryck i oinducerade celler
•hsd S-mutation möjliggör effektiv transformation av ometylerat DNA
• Snabb tillväxt i minimalt medium och förmåga att nå hög

celldensitet Enkelt att använda One Shot-format
BL21 Star (DE3) pLysS kemiskt kompetenta E. coli -celler levereras i det bekväma, enreaktionsformatet One Shot. Formatet för engångsbruk med ett rör gör att alla steg i transformationsprotokollet, upp till plätering, kan ske i samma rör, vilket hjälper till att spara tid och förhindra kontaminering.

Genotyp
F ^-omp T hsd SB (r _B^- , m _B^- ) gal dcm rne 131 (DE3) pLysS (CamR)

Hitta den stam och det format du behöver
• Vi erbjuder andra E. coli -stammar för proteinuttryck.
• För uttryck av giftiga proteiner, överväg BL21-AI One Shot kemiskt kompetent E. coli (kat. nr. C607003).
• BL21 Star (DE3) och andra stammar finns i MultiShot format för applikationer med hög genomströmning.
• Vi erbjuder en mängd olika system för expression av rekombinanta proteiner i E. coli , Champion pET-expressionssystemet ger den högsta nivån av proteinproduktion som finns tillgänglig i alla expressionssystem.