Läs mer
Invitrogen™ pSCREEN-iT™ / lac Z-DEST Gateway™ Vektor Kit
Beskrivning
Använd pSCREEN-iT™ /lacZ-DEST Gateway™ Vector Kit för att bedöma styrkan hos alla RNAi knockdown-reagenser med hjälp av en snabb, känslig och kostnadseffektivβ -gal reporter analys eller identifiera det bästa knockdown-reagenset för RNAi-experiment utan att känna till proteinfunktion, western blotting eller qRT-PCR.
Hur det fungerar:BLOCK-iT RNAi Target Screening-systemmetod använder enβ - galaktosidasaktivitetsanalys för att mäta nedbrytningsförmågan hos ett RNAi-reagens (Stealth RNAi™ siRNA, siRNA, dicer-pooler eller shRNA-innehållande plasmid). För att identifiera det mest effektiva knockdown-reagenset för ditt mål, klona helt enkelt din målgen in i pSCREEN-iT/la cZ-DEST Gateway-vektor. Samtransfektera den resulterande konstruktionen med knockdown-reagenset som testas. Uttryckta gener kommer att smältas samman medβ -galaktosidas, vilket gör att du kan användaβ -galaktosidasnivåer för att mäta mängden RNAi-inducerad nedbrytning av målgenen. Ju effektivare ett specifikt knockdown-reagens är för att förmedla RNAi, desto mer nedbrytning av fusions-mRNA kommer att ske, vilket sänkerβ -gal aktivitet.
De BLOCK-iT RNAi målscreeningsystem inkluderar pSCREEN-iT / lac Z-DEST Gateway-vektor för generering av en konstruktion som innehåller en la cZ/gen av intresse fusion. Denna vektor har:
- vid tR-ställen omedelbart efter la cZ ORF för snabb och effektiv rekombination med vilken som helst vid tL-flankerad Gateway-ingångsvektor för att generera la cZ/målgenfusionerna
- CMV-promotorn för starkt uttryck av la cZ/target-genfusionen, vilket leder till ökad analyskänslighet och bättre diskriminering mellan knockdown-reagenser med varierande effektivitet
- Positionell kloning för att fusionera en gen eller fragment till 3'-änden av la cZ-genen så attβ -galaktosidas kommer att uttryckas även om målfragmentet som testas innehåller stoppkodon
RNAi, RNAi, epigenetik och icke-kodande RNA-forskning, vektorbaserad RNAi
Specifikationer
Specifikationer
| Formatera | Kit |
| Promotor | CMV |
| Produkttyp | β- Galactosidase Reporter Gene Assay System |
| Reportern Gene | Beta-Gal (lacZ) |
| Innehåll och lagring | De pSCREEN-iT™/la cZ-DEST Gateway™ Vector Kit innehåller 6μ g av vektor och 10μ g av pSCREEN-iT™ / lac Z-GW/CDK2 kontrollvektor, den positiva kontrollen ™Stealth RNAi la cZ, en negativ kontroll Scrambled Stealth RNAi™ siRNA och 1X hybridiserings-/utspädningsbuffert. Förvara vid -20 °C. De BLOCK-iT™ RNAi Target Screening Kit innehåller pSCREEN-iT™ / lac Z-DEST Gateway™ Vector Kit, 250μ l av Lipofectamine™ 2000 reagens och FluoReporter™la cZ/Galactosidase Quantification Kit. Förvara Lipofectamine™ 2000 Reagens vid +4 °C. Förvara FluoReporter™ Kit vid -20 °C skyddat från ljus. De BLOCK-iT™ RNAi Target Screening System innehåller BLOCK-iT™ RNAi Target Screening Kit, LR Clonase™ enzymblandning och pCR ¤ 8/GW/TOPO¤ TA Cloning Utrustning. Förvara LR Clonase™ enzymblandning vid -80 °C. De pCR™ 8/GW/TOPO™ TA Cloning Satsen innehåller den färdiga att använda pCR™ 8/GW/TOPO™ vektor, dNTPs, saltlösning, vatten, framåt- och bakåtsekvenseringsprimers, kontrollmall och PCR-primers, One Shot™ TOP10 Kemiskt kompetent E. coli , SOC-medium och en pUC19-kontrollplasmid. Förvara de behöriga cellerna vid -80 °C. Förvara alla andra komponenter vid -20 °C. Alla komponenter är garanterat hållbara i 6 månader när de förvaras på rätt sätt. |
| Provtyp | Syntetisk siRNA, RNAi-plasmider (shRNA, miR) |
| Kvantitet | 20 reaktioner |
| Produktlinje | BLOCK-iT, Gateway |
| För användning med (applikation) | RNAi målscreening |
Endast för forskning. Ej för diagnostik.
Din input är viktig för oss. Fyll i det här formuläret för att ge feedback relaterad till innehållet på denna produkt.