Invitrogen™ SuperScript™ Syntessystem för första strängen för RT-PCR

SuperScript First-Strand Synthesis System för RT-PCR är optimerat för syntes av första-strängs cDNA från renat poly(A) ⁺ eller totalt RNA. Systemet kan användas med så lite som 1 ng eller så mycket som 5μ g av totalt RNA. Efter syntes kan cDNA amplifieras med specifika primrar genom PCR utan mellanliggande organiska extraktioner eller etanolutfällningar. I samband med PCR kan systemet användas för att detektera närvaron av sällsynta meddelanden, för att kvantifiera mängden specifikt mRNA från ett litet antal celler eller för att klona specifika cDNA:er utan att konstruera ett helt cDNA-bibliotek. Systemet är flexibelt och tillåter användning av alla PCR-enzym. Kombinera med AccuPrimeTaq DNA-polymeras eller platinaTaq DNA-polymeras för PCR med högre specificitet eller med AccuPrime Pfx DNA-polymeras för kloningsapplikationer med hög kvalitet.

SuperScript II RT
Den första strängens cDNA-syntesreaktion katalyseras av SuperScript II Reverse Transcriptase (RT). Detta enzym har konstruerats för att reducera RNase H-aktiviteten som bryter ned mRNA under reaktionen med den första strängen, vilket resulterar i större cDNA-syntes i full längd och högre utbyten av första-strängs cDNA än vad som erhålls med RNase H+ RTs. Eftersom SuperScript II RT inte hämmas avsevärt av ribosomalt och överförings-RNA, kan det användas effektivt för att syntetisera första-strängs-cDNA från ett totalt RNA-preparat. Enzymet uppvisar ökad termisk stabilitet och kan användas vid temperaturer upp till 50 °C.

Användning av SuperScript First-Strand Synthesis System för RT-PCR
Detta system har optimerats för att syntetisera första-strängs cDNA från varierande mängder utgångsmaterial. SuperScript II RT-koncentrationen har sänkts och RNaseOUT Rekombinant RNase Inhibitor har lagts till systemet som en del av denna optimeringsprocess. Dessutom har reaktionsbetingelserna modifierats för att ytterligare öka systemets känslighet. Med hjälp av kitet syntetiserar du första-strängs cDNA med antingen totalt RNA eller poly(A) ⁺ utvalt RNA primat med oligo(dT), slumpmässiga primrar eller en genspecifik primer. Utför sedan PCR i ett separat rör med hjälp av primers specifika för genen av intresse.