Invitrogen™ SuperScript™ III Första strängen Synthesis SuperMix

SuperScript III First-Strand Synthesis SuperMix är en optimerad formulering för första-strängs cDNA-syntes från renat poly(A) ⁺ eller totalt RNA. RNA-mål från 100 bp till> 12 kb kan detekteras med detta system. Mängden utgångsmaterial kan variera från 0,1 pg till 5μ g av totalt RNA.

Detta kit innehåller SuperScript III/RNaseOUT-enzymmix, 2X First-Strand-reaktionsmix och en hybridiseringsbuffert. SuperScript III omvänd Transcriptase är en version av MMLV RT som har konstruerats för att minska RNase H-aktivitet och ge ökad termisk stabilitet. Enzymet kan användas för att syntetisera cDNA vid ett temperaturområde på 45-55 –C, °vilket ger ökad specificitet, högre utbyten av cDNA och mer fullängdsprodukt än många tidigare omvända transkriptaser.

Användning av SuperScript III första strängsyntes SuperMix SuperScript
III RT hämmas inte signifikant av ribosomalt och överförings-RNA och kan användas för att syntetisera cDNA från totalt RNA. RNaseOUT Rekombinant RNas-hämmare ingår i enzymblandningen för att skydda mot nedbrytning av mål-RNA på grund av ribonukleaskontamination. 2X First-Strand-reaktionsblandningen inkluderar 10 mM _MgCl2 och 1 mM av varje dNTP i en buffertformulering som har optimerats för första-strängssyntes av cDNA. Parallellbufferten används i det initiala mall-primer-annealingssteget. Separata rör av oligo(dT) ₂₀ och slumpmässiga hexamerer tillhandahålls också. cDNA-syntes kan utföras med användning av antingen totalt RNA eller poly(A) ^+- selekterat RNA primat med oligo(dT), slumpmässiga primrar eller en genspecifik primer.