Läs mer
Invitrogen™ LiveBLAzer™ FRET-B/G Loading Kit med CCF2-AM
Beskrivning
GeneBLAzer™ cellbaserade tester använder membranpermenerade esterformer (CCF2-AM och CCF4-AM) av de negativt laddade fluorescerande beta-laktamassubstratena, CCF2 och CCF4. Dessa lipofila ester går lätt in i cellen, där klyvning av endogena cytoplasmatiska esteraser snabbt omvandlar dem till sina negativt laddade former och därmed fångar dem i cytosolen.
Detektion av GeneBLAzer™ analyser är FRET-baserad. Varje substrat märks med två fluoroforer som bildar ett effektivt FRET-par. I avsaknad av betalaktamasaktivitet resulterar excitering av kumarinet vid 409 nm i den intakta CCF2-molekylen i FRET till fluorescenet, som sänder ut en grön fluorescenssignal vid 518 nm (Figur 1). Vid närvaro av betalaktamasaktivitet skiljer dock klyvningen av CCF2 de två färgämnena rumsligt och stör FRET, så att excitering av kumarinet vid 409 nm nu ger en blå fluorescenssignal vid 447 nm. Denna blå signal kan lätt observeras under mikroskop och kan även upptäckas som en ökning av den blå kanalens avläsning på fluorescerande mikroplattläsare.
CCF2-AM och CCF4-AM-substraten är viktiga analyskomponenter för GeneBLAzer™ plattformen. Dessa substrat är fullt kompatibla med flödescytometri, vilket påskyndar tiden till klonval. Ratiometrisk analys av de blå och gröna signalerna minskar väl-till-brunn-variation på grund av skillnader i cellantal och substratbelastning, vilket leder till höga Z'-faktorvärden och låga variationskoefficienter (CV).
CCF2-AM och CCF4-AM skiljer sig åt genom två kol i bron som kopplar kumaringruppen till laktamringen. Båda är i membranpermeabla, esterifierade former och kan användas för analyser i intakta celler. CCF4-AM har bättre löslighetsegenskaper (löslig i >24 timmar) än CCF2-AM och är därför bäst lämpad för screeningapplikationer. Dessutom har CCF4-AM något bättre FRET och därmed något lägre bakgrund än CCF2-AM.
CCF2-FA är i huvudsak CCF2-substratet utan de ester som finns i AM-versionen. CCF2-FA är deesterifierat och används i celllysatapplikationer, vilket kringgår belastning över cellmembranet och deesterifieringsstegen. Celllysat är den föredragna metoden för applikationer med celler som innehåller en cellvägg. CCF2-FA kan också användas som kontroll för att ersätta excitations- och emissionsspektra för CCF2-AM och CCF4-AM.
Specifikationer
Specifikationer
| Cellpermeabilitet | Cellpermeant |
| Innehåll och lagring | GeneBLAzer™ beta-laktamassubstrat levereras som laddningssatser (tabell 1) och finns i bulkstorlekar. Laddningssatser inkluderar CCF2-AM eller CCF4-AM, DMSO (för lösning A), lösning B och lösning C. CCF2-AM och CCF4-AM tillhandahålls torra och bör förvaras vid -20 C, °torkas och skyddas från ljus. DMSO (för lösning A), lösning B och lösning C bör förvaras vid 22 °C till 25 C, °skyddade från direkt ljus. Något svalare temperaturer kan göra att en vit fällning bildas i lösning B. |
| Detektionsmetod | fluorescens |
| För användning med (utrustning) | Flödescytometer, mikroplattläsare |
| Produktlinje | LiveBLAzer |
| Kvantitet | 200μ g |
| Substrategenskaper | Kemiskt substrat |
| Typ av substrat | Beta-laktamas substrat |
| Substrat | CCF2-AM |
| Typ | FRET-B/G Loading Kit |
Endast för forskning. Ej för diagnostik.
Genom att klicka på Skicka bekräftar du att du kan bli kontaktad av Fisher Scientific angående feedbacken du har lämnat i detta formulär. Vi kommer inte att dela din information för andra ändamål. All kontaktinformation som tillhandahålls ska också underhållas i enlighet med vår Sekretesspolicy.