Läs mer
Invitrogen™ MAGnify™ Chromatin Immunoprecipitation System
Handla allt Applied Biosystems ProdukterBeskrivning
Det isolerade DNA:t är redo för nedströmsanalys med metoder som PCR- eller qPCR-baserade analyser eller massiv parallell DNA-sekvensering. Chromatin immunoprecipitation (ChIP) är en kraftfull teknik för att studera associeringen av vissa proteiner med specifika regioner i genomet. Dessa sekvensspecifika DNA-bindande proteiner tros spela en roll i sådana cellulära processer som DNA-replikation, rekombination, reparation och segregering; kromosomal stabilitet; cellcykelprogression; och epigenetisk tystnad. I en standard ChIP-analys fixeras en cell via formaldehydbehandling och kromatinet klipps och immunoutfälls via en mycket specifik antikropp. Forskaren analyserar sedan DNA:t för att identifiera de genomiska regionerna där de kromatinassocierade proteinerna binder till kromatinet in vivo. När du använder MAGnify system, celler eller vävnad behandlas med formaldehyd för att generera protein-protein- och protein-DNA-tvärbindningar mellan molekyler i omedelbar närhet inom kromatinkomplexet. Cellerna lyseras sedan och kromatinet frisätts från kärnorna och klipps genom sonikering för att minska den genomsnittliga DNA-fragmentstorleken till 200 till 500 bp för analys med kvantitativ realtids-PCR (qPCR) eller 100 till 300 bp för analys genom massiv parallell DNA-sekvensering. Du immunfäller sedan och isolerar det tvärbundna proteinet av intresse med hjälp av en specifik ChIP-kvalificerad antikropp konjugerad till Dynabeads™ Protein A/G. Tvärbindningen av formaldehyd reverseras genom värmebehandling och DNA som är associerat med det proteinet renas. DNA:t är nu redo för nedströmsanalyser såsom end-point PCR eller kvantitativ PCR (qPCR), genomomfattande analyser med hjälp av promotor-tiling arrays eller nästa generations sekvensering. I PCR/qPCR-analys utformas primrar för att spänna över den önskade DNA-sekvensen av intresse, och data visar huruvida det specifika proteinet av intresse är associerat in vivo med den DNA-regionen.
- Känslig: få resultat med lägre provmängder än vad som krävs med traditionella ChIP-arbetsflöden
- Snabbt : protokollet kan slutföras på en enda dag, jämfört med 2 till 3 dagar för traditionell chip-analys
Specifikationer
Specifikationer
| Innehåll och lagring | Module 1 (shipped on wet ice, store at 4°C): • 2 × 1 ml Glycine (1.25 M) • 250 μl Dynabeads™ Protein A/G (do not freeze) • 1.4 ml Reverse Crosslinking Buffer • 500 μl DNA Purification Magnetic Beads (do not freeze) • 1.4 ml DNA Purification Buffer • 200 μl Proteinase K (20 mg/ml) Module 2 (shipped on wet ice, store at 4°C): • 10 ml IP Buffer 1 • 7.5 ml IP Buffer 2 • 8 ml DNA Wash Buffer • 7.2 ml DNA Elution Buffer Module 3 (shipped on dry ice, store at -20°C): • 100 μl Protease Inhibitors (200X) • 15 μl Mouse IgG (1 μg/μl) • 15 μl Rabbit IgG (1 μg/μl) Module (shipped on dry ice, store at -20°C): • 8 ml Dilution Buffer • 3.6 ml Lysis Buffer |
| Kompatibilitet med hög genomströmning | High-throughput Compatible |
| Provtyp | Cell Cultures, DNA (Genomic), Live Cells |
| Produktlinje | MAGnify™ |
| Kvantitet | 24 reactions kit |
| För användning med (applikation) | Chromatin Immunoprecipitation |
| Typ | Immunoprecipitation/Co-Immunoprecipitation Kit |
| Tillräckligt för | 24 Reactions |
Endast för forskning. Ej för diagnostik.
Din input är viktig för oss. Fyll i det här formuläret för att ge feedback relaterad till innehållet på denna produkt.