Thermo Scientific™ Maxima™ H Minus cDNA Synthesis Master Mix

Mastermixen innehåller Maxima H minus Reverse Transcriptase (RT) och RiboLock RNase-hämmare. Maxima H Minus RT är ett avancerat enzym som härstammar från M-MuLV RT genom in vitro-evolution. Enzymet har hög termostabilitet, robusthet, processivitet, ökad cDNA-synteshastighet och brist på RNas-H-aktivitet. Den rekombinanta RiboLock RNase-hämmaren skyddar effektivt RNA-mallen från nedbrytning av RNaserna A, B och C vid temperaturer upp till 55 °C. Masterblandningen innehåller också reaktionsbuffert, dNTP:er, oligo (dT)₁₈ och slumpmässiga hexamerprimers. Ett separat rör med No-RT kontrollmix finns också för bekväm RT-negativkontroll.

Båda kiten kan reproducera cDNA-syntes vid förhöjda temperaturer (50 °C –, 65 °C). Syntesreaktionen är vanligtvis klar på 15 ––30 minuter. Den inkluderade dubbelsträngsspecifika DNas i Maxima H Minus cDNA Synthesis Master Mix med dsDNas möjliggör borttagning av genomiskt DNA från RNA-prover på två minuter utan att påverka kvaliteten eller mängden RNA. Denna dsDNase finns också tillgänglig separat (Cat. Nej. EN0771).

Funktioner i Maxima H Minus cDNA Synthesis Master Mix inkluderar:

• Enrörs-mastermix hjälper till att minska pipetteringsstegen och förbättrar konsekvensen i RT-qPCR-resultaten
• Ökad RT-effektivitet över ett brett spektrum av ingående RNA-mängder och genmål
• Hög termostabilitet för att möjliggöra RT-reaktioner vid 50 ––65 °C temperaturområde
• Integrerat steg för genomisk DNA-borttagning från RNA-prover (Maxima H minus cDNA Synthesis Master Mix med endast dsDNas)

• Fulllängds cDNA-syntes för långa transkript och ORF:er
• Omvänd transkription vid förhöjda temperaturer för att minska effekterna av sekundär struktur
• cDNA-kloning och konstruktionsgenerering
• RNA-seq & enkelcell RNA-seq bibliotekförberedelse
• Isoform- och transkriptkaraktärisering
• Mallväxlingsbaserad fulllängds RNA-seq

Ytterligare information om reaktionskomponenter

• No RT control mix innehåller alla komponenter i Maxima H Minus cDNA Synthesis Master Mix förutom RT. Förekomsten av en PCR-produkt i No RT-kontrollreaktionen indikerar att reaktionen är kontaminerad med DNA. För att ytterligare förbättra effektiviteten av genomisk DNA-eliminering, inkubation av mall RNA med dsDNase (Cat. Nej. EN0771) rekommenderas starkt.
• Nukleasfritt vatten tillhandahålls för reaktionsuppbyggnad och utspädning av prov-DNA. Avsaknaden av exodeoxyribonuklaser, ribonuklaser och fosfataser har bekräftats genom lämpliga kvalitetstester.
• För att ytterligare förbättra effektiviteten i eliminering av genomiskt DNA rekommenderas mall-RNA-inkubation med den inkluderade dsDNasen starkt. (Maxima H minus cDNA Synthesis Master Mix med endast dsDNase)
• DsDNase används för snabb och säker borttagning av kontaminerande genomiskt DNA från RNA-prover. dsDNas inaktiveras lätt med måttlig värmebehandling (55 °C). Det möjliggör ett dramatiskt förenklat arbetsflöde som kombinerar genomisk DNA-eliminering och cDNA-syntes till en enrörsprocedur. (Maxima H minus cDNA Synthesis Master Mix med endast dsDNase)