Thermo Scientific™ Maxima H Minus First Strand cDNA Synthesis Kit

Detta kit tillåter syntes av långa cDNA upp till 20 kb vid förhöjda temperaturer (upp till 65 °C), vilket ersätter andra systems förmåga att producera fullängds cDNA. På grund av ökade synteshastigheter kan reaktionen fullbordas på 30 minuter.

För omvänd transkription använder kitet Maxima H Minus Reverse Transcriptase (RT), som är ett avancerat enzym som härrör från in vitro -utveckling av MMLV RT.

De Maxima H Minus First Strand cDNA Synthesis Kit med dsDNase ger ett dramatiskt förenklat arbetsflöde som kombinerar genomisk DNA-eliminering och cDNA-syntes i en-rörsprocedur. Satsen innehåller ett nytt dubbelsträngsspecifikt DNas (dsDNase) konstruerat för att ta bort kontaminerande genomiskt DNA från RNA-förberedelser på två minuter utan att skada kvaliteten eller kvantiteten av RNA. Mycket specifik dsDNas-aktivitet mot dubbelsträngat DNA säkerställer att enkelsträngat DNA (såsom cDNA och primrar) inte klyvs, och dsDNas-behandlat RNA kan direkt tillsättas för omvänd transkription.

Funktioner av Maxima H Minus First Strand cDNA Synthesis Kit inkluderar:
• Ökade reaktionstemperaturer —den första strängen av cDNA kan syntetiseras inom temperaturområdet 42 –65 °C
• Höga utbyten av fullängds första sträng cDNA med RNA-mallar —upp till 20 kb
• Flexibel priming oligo(dT) —₁₈ , slumpmässig hexamer eller genspecifika primers
• Integrerat genomiskt DNA-borttagningssteg med dsDNase-kit

Tillämpningar First Strand cDNA-
•syntes för RT-PCR
• Konstruktion av cDNA-bibliotek
• Generering av prober för hybridisering
• Antisens RNA-syntes

Innehåll
• Maxima H Minus Enzym Mix
• Oligo(dT) ₁₈ och Random hexamer primers
• 5X RT-buffert
• dNTP-mix
• Nukleasfritt vatten First Strand

Synthesis Kit med dsDNase innehåller också
• dsDNase och 10X dsDNase Buffer

Ytterligare information om reaktionskomponenter
• Maxima H Minus Enzyme Mix innehåller Maxima H Minus Reverse Transcriptase och RiboLock RNas-hämmare. RiboLock RNase Inhibitor skyddar effektivt RNA-mallar från nedbrytning av RNaser A, B och C vid temperaturer upp till 55 °C.
• Oligo(dT) ₁₈ och slumpmässiga hexamerprimrar levereras med kitet. Slumpmässiga hexamerprimrar binder ospecifikt och används för att syntetisera cDNA från alla RNA i en total RNA-population. Oligo(dT)18-primern hybridiserar selektivt till 3'-änden av poly(A)-RNA och syntetiserar cDNA endast från poly(A)-svansförsedd mRNA. Genspecifika primrar kan också användas med kitet för att primera syntes från en specificerad sekvens.
• 10 mM dNTP Mix är en förblandad vattenlösning av dATP, dTTP, dCTP och dGTP.
• Nukleasfritt vatten tillhandahålls för reaktionsinställning och utspädning av prov-DNA. Frånvaron av endo-, exodeoxiribonukleaser, ribonukleaser och fosfataser har bekräftats genom lämpliga kvalitetstester.